RAW264.7 การกระตุ้นการทำงานของแมโครฟาจชนิด M1: คู่มือการปฏิบัติจริงสำหรับการกระตุ้นและการตรวจสอบความถูกต้องใน 48 ชั่วโมง

เซลล์ RAW264.7 ถูกนำมาใช้ในงานวิจัยเกี่ยวกับแมโครฟาจจำนวนมาก เช่น การศึกษาเกี่ยวกับการอักเสบ โครงการวิจัยเกี่ยวกับการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน การทดลองทางภูมิคุ้มกันวิทยาของเนื้องอก และการทดสอบแมโครฟาจพื้นฐานหลายอย่าง เหตุผลก็ง่ายๆ คือ เซลล์เหล่านี้เพาะเลี้ยงได้ไม่ยาก ขยายพันธุ์ได้ค่อนข้างเร็ว และการตอบสนองต่อการกระตุ้นที่ก่อให้เกิดการอักเสบนั้นมักสังเกตได้ง่าย

ส่วนที่เป็นวัฒนธรรมมักจะตรงไปตรงมา แต่ส่วนการปฐมนิเทศของ M1 นั้นต้องใส่ใจมากกว่า

การเติมสารกระตุ้นไม่ได้หมายความว่าแบบจำลองพร้อมใช้งานโดยอัตโนมัติ สภาพของเซลล์มีความสำคัญ ความหนาแน่นของการเพาะเลี้ยงก็สำคัญเช่นกัน ระยะเวลาในการรักษาอาจเปลี่ยนแปลงผลลัพธ์ และวิธีการตรวจสอบเซลล์หลังจากกระตุ้นก็เช่นกัน

สำหรับห้องปฏิบัติการที่ไม่ต้องการเตรียมส่วนประกอบการเหนี่ยวนำทุกอย่างตั้งแต่เริ่มต้น ชุดกระตุ้นการแบ่งกลุ่มแมโครฟาจ M1 RAW264.7 โปรโตคอลนี้ใช้การตั้งค่าการเหนี่ยวนำแบบคงที่ โดยใช้ระยะเวลาการรักษา 48 ชั่วโมง หลังจากนั้น เซลล์สามารถนำไปทำการทดสอบ ELISA, qPCR, flow cytometry, การทดสอบการเพาะเลี้ยงร่วม, การศึกษาการกลืนกิน หรือการทดลองเกี่ยวกับแมโครฟาจอื่นๆ ได้

เหตุใดเซลล์ RAW264.7 จึงนิยมใช้ในการกระตุ้นการทำงานของแมโครฟาจชนิด M1?

RAW264.7 เป็นเซลล์สายพันธุ์คล้ายแมโครฟาจของหนู ซึ่งเป็นที่รู้จักกันดีในห้องปฏิบัติการหลายแห่งที่ทำงานเกี่ยวกับการอักเสบและหน้าที่ของแมโครฟาจ

เซลล์แมโครฟาจปฐมภูมิมีประโยชน์ในบางกรณี แต่ก็ทำให้เกิดความหลากหลายและขั้นตอนการเตรียมการที่มากขึ้น เซลล์ RAW264.7 ขยายจำนวนได้ง่ายกว่าและใช้งานได้ง่ายกว่าในการทดลองซ้ำ ซึ่งเป็นประโยชน์เมื่อจำเป็นต้องทำการทดลองหลายกลุ่มภายใต้สภาวะพื้นฐานเดียวกัน

การเติบโตที่คงที่ทำให้การวางแผนการทดลองง่ายขึ้น

เซลล์ RAW264.7 โดยปกติจะเจริญเติบโตได้โดยไม่มีปัญหามากนักเมื่อรักษาสภาพแวดล้อมการเพาะเลี้ยงตามปกติให้คงที่ การเพาะเลี้ยงในระยะการเจริญเติบโตแบบลอการิทึมที่แข็งแรงสามารถให้เซลล์เพียงพอสำหรับกลุ่มทดลองหลายกลุ่มในระยะเวลาอันสั้น

นั่นไม่ได้หมายความว่าเราจะละเลยสภาพของเซลล์ได้

เซลล์ที่ถูกทิ้งไว้หนาแน่นเกินไปเป็นเวลานานอาจไม่ตอบสนองในลักษณะเดียวกับเซลล์ที่มีสุขภาพดี ปัญหาเดียวกันนี้อาจเกิดขึ้นกับเซลล์ที่เครียดหรือเซลล์ที่ไม่ได้ถูกจัดการอย่างสม่ำเสมอ หากเซลล์เริ่มต้นอยู่ในสภาพที่ไม่ดีอยู่แล้ว ผลลัพธ์ของการเหนี่ยวนำอาจไม่เรียบร้อยไม่ว่าขั้นตอนต่อมาจะดีแค่ไหนก็ตาม

นอกจากนี้ Solarbio ยังให้บริการสำหรับงานที่เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงแมโครฟาจ การส่งสัญญาณการอักเสบ การทดสอบไซโตไคน์ และการวิเคราะห์เซลล์อื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง โซลูชันด้านชีววิทยาของเซลล์และการวิจัยภูมิคุ้มกันวิธีนี้มีประโยชน์เมื่อการทดลองต้องการสารเคมีมากกว่าหนึ่งประเภท และต้องวางแผนขั้นตอนการทำงานทั้งหมดร่วมกัน

การกระตุ้น M1 ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงการทำงานที่สามารถตรวจจับได้

หลังจากกระตุ้นด้วย M1 อย่างเหมาะสมแล้ว เซลล์ RAW264.7 จะไม่คงสภาพเดิมเหมือนในสภาวะการเพาะเลี้ยงปกติ

รูปร่างของเซลล์เปลี่ยนแปลงไป เครื่องหมายบนพื้นผิวบางอย่างก็เปลี่ยนแปลงเช่นกัน ปริมาณของไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบซึ่งถูกปล่อยออกมาในตัวกลางเพาะเลี้ยงก็อาจเพิ่มขึ้นได้

การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ทำให้มีหลายวิธีในการตรวจสอบว่าแบบจำลองทำงานได้หรือไม่

การดูผ่านกล้องจุลทรรศน์เป็นวิธีที่รวดเร็วที่สุด แต่ไม่ควรเป็นวิธีเดียว เซลล์สามารถเปลี่ยนรูปร่างได้เนื่องจากความหนาแน่น ความเครียด หรือการจัดการ นั่นเป็นเหตุผลที่การวิเคราะห์ด้วยเครื่องฟลูออเรสเซนซ์ไซโตเมทรีและการตรวจจับไซโตไคน์จึงมีประโยชน์ในการทดลองเดียวกัน

จะชักนำเซลล์ RAW264.7 ไปสู่ฟีโนไทป์ M1 ได้อย่างไร?

ขั้นตอนการเหนี่ยวนำที่กำหนดไว้ตายตัวทำให้การทดลองซ้ำทำได้ง่ายขึ้น นอกจากนี้ยังช่วยประหยัดเวลาที่ปกติแล้วต้องใช้ในการปรับส่วนประกอบแต่ละชิ้นทีละชิ้นอีกด้วย

เริ่มต้นด้วยเซลล์ที่แข็งแรงและมีความหนาแน่นที่เหมาะสม

เริ่มต้นด้วยเซลล์ RAW264.7 ในระยะการเจริญเติบโตแบบลอการิทึม สามารถใช้เซลล์ที่มีความหนาแน่นประมาณ 80-90% สำหรับการกระตุ้นการสร้างโปรตีนได้

รวบรวมเซลล์ นับจำนวนเซลล์ และแขวนลอยเซลล์ในสารละลายเหนี่ยวนำการโพลาไรซ์ M1 ที่อุ่นไว้ก่อนแล้ว สามารถใช้ความหนาแน่นเริ่มต้นประมาณ 2 × 10^5 เซลล์/มิลลิลิตรได้

สำหรับจานเพาะเชื้อแบบ 6 หลุม ปริมาณ 2 มิลลิลิตรต่อหลุมเป็นปริมาณที่เหมาะสม ส่วนจานเพาะเชื้อแบบ 12 หลุม สามารถใช้ปริมาณ 1 มิลลิลิตรต่อหลุมได้

ควรตรวจสอบความหนาแน่นของการเพาะเลี้ยงเซลล์อย่างละเอียด โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อทำการจำลองแบบเป็นครั้งแรก เซลล์ที่เริ่มต้นด้วยความหนาแน่นที่น้อยเกินไป อาจยังคงน้อยเกินไปหลังจากผ่านไป 48 ชั่วโมง ในขณะที่เซลล์ที่เพาะเลี้ยงหนาแน่นเกินไป อาจแออัดกันก่อนที่กระบวนการเหนี่ยวนำจะเสร็จสมบูรณ์

การใช้กลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษาจะช่วยได้มาก เพราะจะทำให้ได้ข้อมูลอ้างอิงโดยตรงทั้งในด้านความหนาแน่นและรูปร่างของเซลล์

รักษาเงื่อนไขการเหนี่ยวนำให้คงที่ตลอด 48 ชั่วโมง

ส่วนประกอบสำหรับการกระตุ้นการสร้างแอนติบอดีในชุดอุปกรณ์นี้ จะถูกใช้ในความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1X ในระบบเพาะเลี้ยงเซลล์ RAW264.7 ตามที่แนะนำ

หลังจากเพาะเลี้ยงเซลล์แล้ว จะนำเซลล์ไปเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 37°C โดยมีก๊าซ CO2 5% และเพาะเลี้ยงต่อเป็นเวลา 48 ชั่วโมง

ควรเก็บภาพจากกล้องจุลทรรศน์ทั้งในเวลา 24 ชั่วโมงและ 48 ชั่วโมง วิธีนี้ง่ายแต่มีประโยชน์ หากผลลัพธ์สุดท้ายดูผิดปกติ ภาพเหล่านั้นสามารถแสดงให้เห็นว่าเซลล์เริ่มเปลี่ยนแปลงเมื่อใด

หลังจาก 48 ชั่วโมง กระบวนการเหนี่ยวนำจะเสร็จสมบูรณ์ จากนั้นสามารถเก็บเซลล์เพื่อทำการวิเคราะห์ด้วยเครื่องฟลูออโรไซโตเมตรี, qPCR หรือการทดสอบอื่นๆ ที่ใช้เซลล์เป็นพื้นฐานได้ ส่วนของเหลวเหนือตะกอนสามารถเก็บไว้เพื่อวัดระดับไซโตไคน์ได้

สำหรับห้องปฏิบัติการที่ใช้ไซโตไคน์เป็นส่วนหนึ่งของผลลัพธ์สุดท้าย (หมายเหตุ: ข้อความนี้มีความหมายว่า "สิ่งนี้") คู่มือการตรวจหาไซโตไคน์ด้วยชุดตรวจ ELISA สามารถช่วยในการจัดการตัวอย่างและการวางแผนการทดสอบได้

คุณจะยืนยันได้อย่างไรว่าเซลล์ RAW264.7 เข้าสู่สภาวะคล้าย M1 แล้ว?

การพึ่งพาผลลัพธ์เพียงอย่างเดียวไม่มีประโยชน์อย่างแท้จริง

หากรูปร่างของเซลล์เปลี่ยนแปลง ระดับ CD86 เพิ่มขึ้น และไซโตไคน์ที่กระตุ้นการอักเสบก็เพิ่มขึ้นด้วย การประเมินแบบจำลองก็จะง่ายขึ้นมาก แต่หากมีการเปลี่ยนแปลงเพียงอย่างเดียว ควรตรวจสอบสภาวะการเพาะเลี้ยงและการเหนี่ยวนำอีกครั้ง

ตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาเป็นอันดับแรก

เซลล์ RAW264.7 ที่ไม่ได้รับการบำบัด มักจะมีรูปร่างค่อนข้างกลมภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงปกติ

หลังจากเหนี่ยวนำให้เกิดระยะ M1 แล้ว เซลล์อาจมีรูปร่างไม่สม่ำเสมอมากขึ้น อาจปรากฏเซลล์รูปหลายเหลี่ยมและคล้ายอะมีบา ฟิโลโพเดียและลาเมลลิโพเดียอาจมองเห็นได้ง่ายขึ้น และไซโตพลาซึมอาจดูเป็นเม็ดมากขึ้น

การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้สามารถบันทึกได้ง่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์ทั่วไป

อย่างไรก็ตาม ลักษณะทางสัณฐานวิทยาเป็นเพียงการตรวจสอบเบื้องต้นเท่านั้น เซลล์ที่ได้รับความเครียดก็อาจมีลักษณะแตกต่างออกไปได้ เช่นเดียวกับเซลล์ที่อยู่ในสภาพแวดล้อมที่แออัดเกินไป ดังนั้นจงพิจารณาภาพนี้เป็นเพียงส่วนหนึ่งของผลลัพธ์ ไม่ใช่ผลลัพธ์ทั้งหมด

ใช้โฟลว์ไซโตเมทรีเพื่อตรวจสอบฟีโนไทป์ M1

การวิเคราะห์ด้วยเครื่องฟลูออโรไซโตเมตรีช่วยให้เห็นลักษณะฟีโนไทป์ของเซลล์ได้โดยตรงมากขึ้น

แนวทางที่ใช้ได้ผลวิธีหนึ่งคือการใช้ F4/80 และ CD11b เพื่อกำหนดประชากรแมโครฟาจ จากนั้นตรวจสอบการแสดงออกของ CD86 ภายในประชากรนั้น

หลังจากการกระตุ้นที่ประสบความสำเร็จเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ระดับการแสดงออกของ CD86 ควรเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา

วิธีนี้ช่วยแยกแยะการตอบสนองแบบโพลาไรเซชันที่แท้จริงออกจากการเปลี่ยนแปลงรูปร่างของเซลล์อย่างง่ายๆ

ห้องปฏิบัติการที่ยังคงดำเนินการเกี่ยวกับการควบคุมคุณภาพการเพาะเลี้ยงเซลล์ตามปกติ อาจพบปัญหาอื่นๆ อีกด้วย สายเซลล์: ก้าวแรกสู่การวิจัยในหลอดทดลองที่น่าเชื่อถือ มีประโยชน์ เอกลักษณ์ของเซลล์และสภาวะการเพาะเลี้ยงขั้นพื้นฐานสามารถส่งผลกระทบต่อทุกสิ่งที่จะตามมาได้

วัดการปล่อยไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบ

การหลั่งสารไซโตไคน์เป็นอีกหนึ่งส่วนประกอบที่ทำให้เห็นภาพชัดเจนขึ้น

โดยทั่วไปแล้ว IL-1β, IL-6 และ TNF-α จะถูกตรวจสอบในการทดลองกับเซลล์ RAW264.7 M1 หลังจากกระตุ้นแล้ว สามารถเก็บสารละลายส่วนบนของเซลล์เพาะเลี้ยงและนำไปทดสอบด้วยชุดตรวจ ELISA สำหรับหนูได้

Solarbio จำหน่ายชุดตรวจ ELISA สำหรับหนูที่มี IL-1β เป็นองค์ประกอบหลัก ได้แก่ SEKM-0002, SEKM-0007 และ SEKM-0034 ผ่านทางช่องทางต่างๆ กลุ่มผลิตภัณฑ์ชุดตรวจ ELISA ของ Solarbio.

หากแบบจำลอง M1 ถูกกระตุ้นอย่างเหมาะสม ไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบเหล่านี้ควรแสดงการเปลี่ยนแปลงในทิศทางที่เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา

ระดับที่แน่นอนอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับสภาพของเซลล์และการจัดเตรียมการทดลอง ด้วยเหตุนี้ กลุ่มควบคุมจึงควรได้รับการเตรียมและเก็บรวบรวมในลักษณะเดียวกับกลุ่มที่ได้รับการกระตุ้น

ผลิตภัณฑ์ใดบ้างที่สามารถนำมาใช้ร่วมกันเพื่อให้ได้เวิร์กโฟลว์ RAW264.7 M1 ที่สมบูรณ์แบบ?

สารเหนี่ยวนำเป็นเพียงส่วนหนึ่งของกระบวนการเท่านั้น

การทดลอง RAW264.7 M1 เริ่มต้นด้วยตัวเซลล์เอง จากนั้นจึงผ่านกระบวนการเพาะเลี้ยง การเหนี่ยวนำ และสุดท้ายคือการยืนยันฟีโนไทป์ หากขั้นตอนเหล่านี้ถูกแยกออกจากกัน การแก้ไขปัญหาจะทำได้ยากขึ้น

การเพาะเลี้ยงเซลล์และการเหนี่ยวนำ M1

เซลล์ SCC211800 RAW264.7 สามารถใช้ร่วมกับอาหารเลี้ยงเซลล์เฉพาะสำหรับเซลล์ C211800 RAW264.7 ได้

ชุดกระตุ้นการสร้างแมโครฟาจชนิด M1 CA4980 RAW264.7 ครอบคลุมขั้นตอนการกระตุ้น ส่วนสารกระตุ้นการสร้างแมโครฟาจชนิด M1 CA4981 RAW264.7 มีจำหน่ายเมื่อต้องการสารกระตุ้นแยกต่างหาก

การใช้การเพาะเลี้ยงเซลล์และการเหนี่ยวนำแบบคงที่ยังช่วยให้การเปรียบเทียบผลการทดลองซ้ำทำได้ง่ายขึ้น เมื่อวัสดุพื้นฐานหลายอย่างเปลี่ยนแปลงไปในแต่ละชุดการทดลอง จะทำให้ยากที่จะทราบว่าผลลัพธ์ที่แตกต่างกันนั้นเกิดจากชีววิทยาหรือเกิดจากการตั้งค่าการทดลองกันแน่

การตรวจสอบความถูกต้องของ ELISA และ Flow Cytometry

สำหรับการทดสอบไซโตไคน์ ชุดทดสอบ SEKM-0002, SEKM-0007 และ SEKM-0034 ครอบคลุม IL-1β, IL-6 และ TNF-α ของหนู

สำหรับการวิเคราะห์ด้วยเครื่องฟลูออโรไซโตเมตรี สามารถเพิ่มชุดตรวจ SFCMZ-008 RAW 264.7 Cell M1 Macrophage Polarization Induction and Identification Flow Cytometry Kit ได้เมื่อการระบุฟีโนไทป์เป็นส่วนหนึ่งของการศึกษา

นักวิจัยที่ทำงานด้านการส่งสัญญาณของแบบจำลองก็สามารถเรียกดูข้อมูลได้เช่นกัน เส้นทางโซลาร์บิโอ เพื่อค้นหาเป้าหมายในเส้นทางที่เกี่ยวข้อง สารประกอบ และเครื่องมือวิจัย

การเชื่อมโยงขั้นตอนเหล่านี้เข้าด้วยกันจะทำให้การแก้ไขปัญหาทำได้ง่ายขึ้น หากรูปร่างของเซลล์ดูปกติ แต่ผลการตรวจไซโตไคน์ไม่ปกติ ปัญหาอาจตรวจสอบได้จากฝั่งการตรวจสอบความถูกต้อง หากเซลล์ดูไม่ดีอยู่แล้วก่อนการกระตุ้น ก็ไม่มีเหตุผลที่จะโทษผลการตรวจ ELISA ในภายหลัง

คุณควรตรวจสอบอะไรบ้างก่อนเริ่มการทดลอง?

ชุดอุปกรณ์ดังกล่าวช่วยให้ขั้นตอนการเหนี่ยวนำง่ายขึ้น แต่ไม่สามารถแก้ไขเซลล์ที่ไม่แข็งแรงได้

ตรวจสอบเซลล์เพาะเลี้ยง RAW264.7 ก่อนเริ่มต้น หากเซลล์มีจำนวนมากเกินไป เครียด หรือเจริญเติบโตไม่สม่ำเสมอ โดยทั่วไปแล้วควรเริ่มต้นใหม่ด้วยเซลล์เพาะเลี้ยงที่มีสุขภาพดีกว่า

เก็บตัวอย่างควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษาไว้ ใช้ความหนาแน่นของการเพาะเชื้อเท่ากันในแต่ละชุดการทดลอง ถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ในช่วงเวลาที่กำหนดไว้ แทนที่จะถ่ายเฉพาะเมื่อมีสิ่งผิดปกติเกิดขึ้นเท่านั้น

สำหรับการวิเคราะห์ไซโตไคน์ ให้เก็บตัวอย่างสารละลายส่วนบนในเวลาเดียวกันสำหรับทุกกลุ่ม การเปลี่ยนแปลงเวลาเพียงเล็กน้อยอาจทำให้เกิดความแปรปรวนเพิ่มขึ้นได้

การวิเคราะห์เซลล์ด้วยเครื่องฟลูออโรไซโตเมตรีจำเป็นต้องใช้แนวทางการกำหนดขอบเขตที่แน่นอน การเปลี่ยนขอบเขตหลังจากดูผลลัพธ์แล้วอาจทำให้กลุ่มสองกลุ่มดูแตกต่างกันมากกว่าที่เป็นจริง

การตัดสินใจเกี่ยวกับผลการตรวจก่อนเริ่มกระบวนการเหนี่ยวนำจะช่วยได้ หาก CD86, IL-1β, IL-6 และ TNF-α เป็นส่วนหนึ่งของแผนอยู่แล้ว การเก็บเซลล์และสารละลายส่วนบนก็สามารถจัดเตรียมได้อย่างเหมาะสมตั้งแต่เริ่มต้น

สำหรับโครงการที่ต้องการความช่วยเหลือเพิ่มเติมในด้านการคัดเลือกผลิตภัณฑ์ แอนติบอดี โปรตีน หรือบริการวิจัยอื่นๆ บริการด้านเทคนิคของ Solarbio สามารถใช้งานร่วมกับขั้นตอนการทำงานมาตรฐานของผลิตภัณฑ์ได้

ข้อสรุป

เซลล์ RAW264.7 เป็นตัวเลือกที่เหมาะสมสำหรับการศึกษาการเปลี่ยนแปลงของแมโครฟาจชนิด M1 เนื่องจากเจริญเติบโตได้ง่าย ตอบสนองต่อการกระตุ้นการอักเสบ และสามารถตรวจสอบได้ด้วยวิธีการที่ใช้กันอยู่แล้วในห้องปฏิบัติการชีววิทยาของเซลล์ส่วนใหญ่

กระบวนการเหนี่ยวนำ 48 ชั่วโมงนั้นไม่ซับซ้อน รายละเอียดปลีกย่อยต่างหากที่มักจะเป็นตัวตัดสินว่าผลลัพธ์จะสะอาดหรือไม่

เริ่มต้นด้วยเซลล์ที่แข็งแรง รักษาความหนาแน่นให้คงที่ ทำการทดลองควบคุมโดยไม่ได้รับการรักษา บันทึกภาพที่เวลา 24 ชั่วโมงและ 48 ชั่วโมง

จากนั้นตรวจสอบปลายทางมากกว่าหนึ่งจุด

ลักษณะทางสัณฐานวิทยาให้เบาะแสแรก F4/80, CD11b และ CD86 ให้ผลลัพธ์จากการวิเคราะห์ด้วยโฟลว์ไซโตเมทรี ส่วน IL-1β, IL-6 และ TNF-α ให้ข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับไซโตไคน์

เมื่อผลลัพธ์เหล่านั้นชี้ไปในทิศทางเดียวกัน โมเดล RAW264.7 M1 ก็จะใช้งานได้ง่ายขึ้นมากในการทดลองเกี่ยวกับการอักเสบ การตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน และการทำงานของแมโครฟาจในภายหลัง

หากต้องการความช่วยเหลือในการจับคู่ผลิตภัณฑ์เพาะเลี้ยงเซลล์ สารกระตุ้นการเหนี่ยวนำ ชุดตรวจ ELISA หรือเครื่องมือวิเคราะห์เซลล์ด้วยเครื่องฟลูออเรสเซนซ์กับแผนการทดลอง นักวิจัยสามารถขอความช่วยเหลือได้ ติดต่อ Solarbio ก่อนที่จะประกอบขั้นตอนการทำงานทั้งหมดเข้าด้วยกัน

คำถามที่พบบ่อย

Q1: การเกิดโพลาไรเซชันของแมโครฟาจ RAW264.7 M1 ใช้เวลานานเท่าใด?

A1: ขั้นตอนการทำงานของ CA4980 ใช้ระยะเวลากระตุ้น 48 ชั่วโมง การเก็บภาพจากกล้องจุลทรรศน์ที่เวลา 24 และ 48 ชั่วโมงนั้นมีประโยชน์ เพื่อเปรียบเทียบการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ในระหว่างการรักษา

Q2: ความหนาแน่นของเซลล์เท่าใดที่สามารถใช้ได้ก่อนการเหนี่ยวนำ M1?

A2: ความหนาแน่นเริ่มต้นในการทำงานควรอยู่ที่ประมาณ 2 × 10^5 เซลล์/มล. หลังจากเก็บและนับเซลล์ RAW264.7 ที่อยู่ในระยะเจริญเติบโตอย่างสมบูรณ์แล้ว ความหนาแน่นสุดท้ายควรตรวจสอบกับรูปแบบของเพลทและสภาวะการเจริญเติบโตของเซลล์อีกครั้ง

Q3: ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์เพียงอย่างเดียวสามารถยืนยันการเกิดโพลาไรเซชัน M1 ได้หรือไม่?

A3: ไม่ใช่ การตรวจทางสัณฐานวิทยาเป็นประโยชน์สำหรับการตรวจสอบอย่างรวดเร็ว แต่ไม่เพียงพอด้วยตัวมันเอง ตัวบ่งชี้จากการวิเคราะห์ด้วยเครื่องฟลูออโรไซโตเมตรีและการวัดระดับไซโตไคน์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบจะให้การสนับสนุนผลลัพธ์สุดท้ายที่ดีกว่า

Q4: ตัวบ่งชี้โฟลว์ไซโตเมทรีใดบ้างที่สามารถใช้สำหรับการแยกกลุ่มเซลล์ RAW264.7 M1 ได้?

A4: F4/80 และ CD11b สามารถใช้ระบุประชากรแมโครฟาจได้ จากนั้นจึงตรวจสอบ CD86 ซึ่งเป็นเครื่องหมายที่เกี่ยวข้องกับ M1 การเพิ่มขึ้นของ CD86 หลังจากการกระตุ้นจะสนับสนุนผลลัพธ์ของการเกิดโพลาไรเซชัน M1

Q5: สามารถวัดระดับไซโตไคน์ใดได้บ้างหลังจากการกระตุ้น RAW264.7 M1?

A5: IL-1β, IL-6 และ TNF-α เป็นตัวเลือกที่นิยมใช้กัน สามารถนำสารละลายส่วนบนของเซลล์ที่เก็บได้หลังการกระตุ้นไปทดสอบด้วยชุดตรวจ ELISA สำหรับหนูได้

Q6: สามารถทำการทดลองขั้นต่อไปใดได้บ้างหลังจากเหนี่ยวนำ M1 แล้ว?

A6: เซลล์ RAW264.7 ที่ถูกกระตุ้นสามารถนำไปใช้ในการทดสอบ ELISA, qPCR, โฟลว์ไซโตเมทรี, การศึกษาการเพาะเลี้ยงร่วม, การทดสอบการกลืนกินของเซลล์ และการทดลองอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบของแมโครฟาจและหน้าที่ทางภูมิคุ้มกัน