COX4I1 ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมการโหลดไมโทคอนเดรียเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ Western Blot ที่น่าเชื่อถือ

การทดสอบ Western blot อาจล้มเหลวได้ด้วยวิธีธรรมดาๆ ตัวอย่างอาจสมบูรณ์ดี โปรตีนเป้าหมายก็มีอยู่ แต่ช่องหนึ่งมีโปรตีนมากกว่าอีกช่องหนึ่ง หรืออีกช่องหนึ่งถ่ายโอนโปรตีนไม่สม่ำเสมอ บางครั้งแอนติบอดีหลักอาจมีความเข้มข้นมากเกินไป ทำให้ภาพสุดท้ายดูเหมือนมีความแตกต่างทางชีวภาพ แม้ว่าปัญหาจะเริ่มต้นจากขั้นตอนการทำงานที่ใดก็ตาม

การเลือกตัวควบคุมปริมาณสารตั้งต้นสำหรับการทดลองเกี่ยวกับไมโทคอนเดรียจะต้องใช้ความคิดมากกว่าการทดลองที่ใช้สารละลายเซลล์ทั้งหมด แม้ว่า GAPDH, β-Actin และ β-Tubulin จะถูกใช้กันอย่างแพร่หลายในการทดลองต่างๆ แต่ก็ไม่ได้หมายความว่าจะเป็นตัวเลือกที่ดีที่สุดเสมอไปสำหรับการศึกษาเกี่ยวกับไมโทคอนเดรีย

COX4I1 มักใช้เป็นตัวควบคุมปริมาณไมโทคอนเดรีย มันเป็นส่วนหนึ่งของคอมเพล็กซ์ IV ในห่วงโซ่การหายใจ ซึ่งตั้งอยู่ในเยื่อหุ้มไมโทคอนเดรียชั้นใน แถบของ COX4I1 ในเวสเทิร์นบลอตมักมีขนาดประมาณ 18 kDa การรวมกันนี้ทำให้มันมีประโยชน์เมื่อตัวอย่างนั้นเป็นไมโทคอนเดรียเอง

โซลาร์บิโอ จำหน่ายแอนติบอดี COX4I1 พร้อมกับแอนติบอดีอื่นๆ และสารเคมีสำหรับการวิจัยโปรตีนที่ใช้ใน Western blot, IHC, IF และ FCM มีให้เลือกทั้งแอนติบอดีแบบโมโนโคลนอล โพลีโคลนอล และรีคอมบิแนนท์ ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องจำกัดตัวเลือกไว้เพียงรูปแบบเดียว

COX4I1 คืออะไร และทำไมจึงสำคัญ?

COX4I1 หมายถึง ไซโตโครมซีออกซิเดส ซับยูนิต 4 ไอโซฟอร์ม 1 ยีนนี้ถูกสร้างขึ้นโดยยีนในนิวเคลียส จากนั้นถูกลำเลียงไปยังไมโทคอนเดรีย ซึ่งจะกลายเป็นส่วนหนึ่งของไซโตโครมซีออกซิเดส หรือที่เรียกว่า คอมเพล็กซ์ IV

นักวิจัยมักพบ COX4I1 ในสองสถานการณ์ คือ บางครั้งมันเป็นโปรตีนที่กำลังศึกษาอยู่ และบางครั้งมันก็ทำหน้าที่ควบคุมการโหลดของไมโทคอนเดรีย

COX4I1 ในห่วงโซ่การหายใจของไมโทคอนเดรีย

คอมเพล็กซ์ IV เป็นเอนไซม์คอมเพล็กซ์สุดท้ายของห่วงโซ่การลำเลียงอิเล็กตรอนในไมโทคอนเดรีย ทำหน้าที่รับอิเล็กตรอนจากไซโตโครมซีและถ่ายโอนไปยังออกซิเจนโมเลกุล ลดออกซิเจนให้กลายเป็นน้ำ

ปฏิกิริยานี้ช่วยรักษาระดับความเข้มข้นของโปรตอนข้ามเยื่อหุ้มไมโทคอนเดรียชั้นใน ระดับความเข้มข้นนี้สามารถนำไปใช้ในกระบวนการออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่นเพื่อผลิต ATP ได้

COX4I1 มีส่วนเกี่ยวข้องกับการรักษาการทำงานปกติของคอมเพล็กซ์ IV หากการหายใจระดับไมโทคอนเดรียเปลี่ยนแปลงไป COX4I1 อาจมีความสำคัญต่อคำถามที่กำลังศึกษามากกว่าที่จะทำหน้าที่เป็นเพียงแถบอ้างอิงเท่านั้น

นี่เป็นเหตุผลหนึ่งที่โปรตีนชนิดเดียวกันปรากฏในโครงการวิจัยเกี่ยวกับการเผาผลาญในไมโทคอนเดรีย ภาวะเครียดออกซิเดชัน เฟอร์โรพโทซิส และการผลิตพลังงาน (Solarbio) เส้นทางการวิจัย ส่วนนี้ยังจัดกลุ่มผลิตภัณฑ์ตามประเภทของงานวิจัยเหล่านี้ด้วย

น้ำหนักโมเลกุลและตำแหน่งของ COX4I1

โปรตีน COX4I1 ของมนุษย์เป็นโปรตีนที่มีกรดอะมิโน 169 ตัว และมีน้ำหนักโมเลกุลตามทฤษฎีประมาณ 19 กิโลดาลตัน อย่างไรก็ตาม โปรตีนที่ตรวจพบโดยวิธีเวสเทิร์นบลอตติงมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 18 กิโลดาลตัน

ตำแหน่งที่อยู่มีความสำคัญไม่แพ้ขนาด COX4I1 ส่วนใหญ่จะอยู่ภายในเยื่อหุ้มชั้นในของไมโทคอนเดรีย

หากคุณกำลังทำการวิเคราะห์ตัวอย่างไมโทคอนเดรียที่ผ่านการเพิ่มความเข้มข้นแล้ว ตำแหน่งนั้นก็เหมาะสม เนื่องจากคุณกำลังเปรียบเทียบตัวอย่างไมโทคอนเดรียหนึ่งกับอีกตัวอย่างหนึ่ง การใช้โปรตีนไมโทคอนเดรียเป็นตัวอ้างอิงจึงมักมีประโยชน์มากกว่าการใช้โปรตีนพื้นฐานในไซโทพลาสซึมเป็นตัวอ้างอิง

น้ำหนักโมเลกุลที่น้อยยังช่วยให้ COX4I1 มีตำแหน่งที่ค่อนข้างชัดเจนบนแผ่นบล็อต โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อเป้าหมายหลักมีขนาดใหญ่กว่ามาก

การแสดงออกของ COX4I1 ในเนื้อเยื่อต่างๆ

COX4I1 มีการแสดงออกอย่างแพร่หลายในเซลล์ที่มีไมโทคอนเดรีย จึงเข้าใจได้ง่ายว่าทำไมเนื้อเยื่อที่มีความต้องการพลังงานสูงจึงมีความสำคัญในที่นี้

เนื้อเยื่อเหล่านี้พึ่งพาการผลิต ATP โดยไมโทคอนเดรียเป็นอย่างมาก ดังนั้น COX4I1 จึงปรากฏบ่อยครั้งในงานวิจัยเกี่ยวกับการเผาผลาญของกล้ามเนื้อ รวมถึงงานวิจัยเกี่ยวกับแบบจำลองทางระบบประสาท ตับ และความผิดปกติของไมโทคอนเดรีย

นักวิจัยที่ทำงานในสาขาเหล่านี้สามารถค้นหาแอนติบอดีหลัก แอนติบอดีรอง สารเคมีชีวภาพ และวัสดุที่เกี่ยวข้องได้ผ่านทาง Solarbio กลุ่มผลิตภัณฑ์.

เหตุใดจึงใช้ COX4I1 เป็นตัวควบคุมการโหลดไมโทคอนเดรีย?

มีการควบคุมการโหลดเพื่อให้การเปรียบเทียบเป็นไปอย่างยุติธรรม

หากแถบทั้งสองควรจะมีปริมาณโปรตีนไมโทคอนเดรียใกล้เคียงกัน แถบอ้างอิงจะช่วยแสดงให้เห็นว่าเป็นเช่นนั้นจริงหรือไม่ โดยทั่วไปแล้ว COX4I1 มักใช้ได้ดีในกรณีนี้ เพราะมันมาจากส่วนประกอบของไมโทคอนเดรียเอง

เปรียบเทียบ COX4I1 กับกลุ่มควบคุมการโหลดเซลล์ทั้งหมด

GAPDH มีประโยชน์ β-Actin ก็มีประโยชน์เช่นกัน และ β-Tubulin ก็เช่นกัน แต่ทั้งหมดนี้ไม่ได้หมายความว่าควรนำพวกมันไปใช้ในทุกการทดลองเกี่ยวกับไมโทคอนเดรียโดยอัตโนมัติ

เมื่อแยกหรือเพิ่มปริมาณไมโทคอนเดรียแล้ว ตัวอย่างที่ได้จะแตกต่างออกไป

GAPDH เป็นโปรตีนที่อยู่ในไซโตพลาสซึมเป็นหลัก β-Actin และ β-Tubulin ก็ไม่ใช่โปรตีนที่อยู่ในเยื่อหุ้มชั้นในของไมโทคอนเดรียเช่นกัน หากคำถามหลักของคุณเกี่ยวกับปริมาณโปรตีนในไมโทคอนเดรีย สัญญาณที่ได้จากโปรตีนเหล่านี้อาจไม่ได้สะท้อนถึงภาระของไมโทคอนเดรียได้ดีนัก

COX4I1 มีค่าใกล้เคียงกับสิ่งที่คุณกำลังวัดอยู่จริงมากกว่า

นี่ไม่ได้หมายความว่ามันดีกว่าในทุกด้าน เพียงแต่ทำให้มันเหมาะสมมากขึ้นในขั้นตอนการทำงานของไมโทคอนเดรียเวสเทิร์นบล็อตหลายๆ แบบ Solarbio ยังมีบริการอื่นๆ อีกด้วย สารละลายเวสเทิร์นบล็อต ครอบคลุมถึงการหาปริมาณโปรตีน อิเล็กโทรโฟเรซิส การถ่ายโอน แอนติบอดี และการตรวจจับด้วยเคมีเรืองแสง

เมื่อใดที่ COX4I1 เป็นตัวเลือกที่ดี

COX4I1 มักเป็นตัวเลือกที่เหมาะสมเมื่อตัวอย่างเป็นส่วนประกอบของไมโทคอนเดรีย และโปรตีนเป้าหมายก็เป็นโปรตีนในไมโทคอนเดรียเช่นกัน

โปรตีนในห่วงโซ่การหายใจเป็นตัวอย่างที่เห็นได้ชัด หลักการเดียวกันนี้ใช้ได้กับการศึกษาโปรตีนในเยื่อหุ้มไมโทคอนเดรีย กระบวนการฟอสโฟรีเลชันแบบออกซิเดชัน และการเผาผลาญพลังงานในไมโทคอนเดรียด้วย

หาก COX4I1 มีความเสถียรในทุกกลุ่ม แถบของ COX4I1 สามารถใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงเมื่อเปรียบเทียบระดับโปรตีนเป้าหมายได้

โดยปกติแล้วส่วนนี้เป็นส่วนที่คนส่วนใหญ่ให้ความสำคัญมากที่สุดในทางปฏิบัติ การควบคุมต้องคงที่มากพอที่จะทำให้ค่าที่ได้กลับสู่ภาวะปกติ ไม่มีอะไรซับซ้อนไปกว่านั้น

ในกรณีที่ COX4I1 อาจไม่เหมาะสม

มีการทดลองบางอย่างที่ COX4I1 เป็นตัวควบคุมการโหลดที่ไม่ดี

หากการรักษาทำให้จำนวนไมโทคอนเดรีย มวลไมโทคอนเดรีย การแสดงออกของคอมเพล็กซ์ IV หรือการฟอสฟอริเลชันแบบออกซิเดทีฟเปลี่ยนแปลงไป COX4I1 ก็อาจเปลี่ยนแปลงไปด้วยเช่นกัน

นั่นทำให้เกิดปัญหาที่เห็นได้ชัด โปรตีนไม่สามารถเป็นตัวอ้างอิงที่เสถียรได้ หากการทดลองนั้นเกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของโปรตีนโดยตรง

สำหรับแบบจำลองประเภทนี้ ควรตรวจสอบระดับ COX4I1 ในกลุ่มควบคุมและกลุ่มทดลองก่อน การทดสอบอย่างรวดเร็วสามารถป้องกันไม่ให้ข้อมูลทั้งหมดถูกปรับค่ามาตรฐานโดยใช้โปรตีนผิดตัวได้

COX4I1 เกี่ยวข้องกับการวิจัยเกี่ยวกับไมโทคอนเดรียอย่างไร?

COX4I1 ไม่ได้เป็นเพียงตัวบ่งชี้การทำงานพื้นฐานของไมโทคอนเดรียเท่านั้น

COX4I1 มีบทบาททางชีววิทยาของตัวเอง ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งในการศึกษาเกี่ยวกับการทำงานผิดปกติของไมโตคอนเดรีย การเผาผลาญของเซลล์มะเร็ง และความเครียดของเซลล์

COX4I1 และการฟอสฟอริเลชันแบบออกซิเดทีฟ

COX4I1 เป็นส่วนหนึ่งของคอมเพล็กซ์ IV ดังนั้นจึงอยู่ภายในระบบออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่นโดยตรง

การเปลี่ยนแปลงในคอมเพล็กซ์ IV อาจส่งผลต่อประสิทธิภาพการใช้ออกซิเจนและการผลิต ATP ของไมโทคอนเดรีย นอกจากนี้ยังอาจเกิดผลกระทบอื่นๆ ตามมา เช่น การเปลี่ยนแปลงศักย์ไฟฟ้าของเยื่อหุ้มเซลล์ สมดุลรีดอกซ์ และการเผาผลาญพลังงาน

ด้วยเหตุนี้ COX4I1 จึงสามารถใช้เป็นทั้งตัวควบคุมปริมาณสารตั้งต้นและเป้าหมายในการวิจัยได้

หากคุณกำลังศึกษาเกี่ยวกับกระบวนการออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่นโดยตรง คุณควรระมัดระวังเป็นพิเศษ เพราะ COX4I1 อาจไม่แสดงพฤติกรรมเหมือนโปรตีนอ้างอิงที่เป็นกลางภายใต้สภาวะเหล่านั้นอีกต่อไป

COX4I1 ในการวิจัยมะเร็ง

นอกจากนี้ ยังมีการศึกษา COX4I1 ในแบบจำลองที่เกี่ยวข้องกับมะเร็งด้วย

ในโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเฉียบพลัน การสูญเสีย COX4I1 มีความเชื่อมโยงกับการเปลี่ยนแปลงในโครงสร้างจุลภาคของไมโทคอนเดรียและกระบวนการออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่น งานวิจัยในด้านนี้ยังได้ศึกษาถึงภาวะเครียดของไมโทคอนเดรียและภาวะเฟอร์โรพโทซิสด้วย

มีการศึกษา COX4I1 ในเนื้องอกสมองชนิดร้ายแรงด้วยเช่นกัน รวมถึงความเชื่อมโยงกับการเพิ่มจำนวนของเซลล์เนื้องอก

นี่เป็นตัวอย่างที่ดีที่แสดงให้เห็นว่าบริบทมีความสำคัญอย่างไร ในการทดสอบไมโทคอนเดรียแบบทั่วไป COX4I1 อาจทำหน้าที่เป็นตัวควบคุม แต่ในโครงการวิจัยเกี่ยวกับการเผาผลาญของเซลล์มะเร็ง COX4I1 เองอาจมีการเปลี่ยนแปลง

COX4I1 และความเครียดของเซลล์

การขาด COX4I1 ยังมีความสัมพันธ์กับการตอบสนองต่อความเสียหายของ DNA ที่บกพร่อง การแบ่งตัวของเซลล์ที่ลดลง และการเสื่อมสภาพของเซลล์ก่อนวัยอันควร

สำหรับงานเวสเทิร์นบล็อต หลักการสำคัญนั้นง่ายมาก

อย่าเลือกระบบควบคุมการโหลดเพียงเพราะมันเป็นที่นิยม แต่ควรเลือกเพราะมันมีความเสถียรในแบบจำลองของคุณเอง

ควรเลือกแอนติบอดี COX4I1 อย่างไร?

เมื่อเลือก COX4I1 ได้แล้ว ขั้นตอนต่อไปคือการเลือกแอนติบอดี

การได้แถบเวสเทิร์นบล็อตที่ชัดเจนนั้นขึ้นอยู่กับชนิดของสิ่งมีชีวิต ชนิดของตัวอย่าง รูปแบบของแอนติบอดี การเจือจาง และการตรวจสอบความถูกต้องของการใช้งาน ชื่อผลิตภัณฑ์เพียงอย่างเดียวไม่ได้บอกคุณว่ามันจะทำงานได้ดีในระบบของคุณหรือไม่

แอนติบอดีโมโนโคลนอล COX4I1

แอนติบอดีโมโนโคลนอลจะจดจำอีพิโทปที่กำหนดไว้หนึ่งตำแหน่งบนเป้าหมาย

สำหรับการทำ Western blot ซ้ำๆ วิธีนี้จะมีประโยชน์ เพราะรูปแบบการจดจำจะถูกควบคุมได้ดียิ่งขึ้น

ที่ แอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้าน COX4I1 K200031M เป็นตัวเลือกโมโนโคลนอลแอนติบอดีจากหนูสำหรับการตรวจจับ COX4I1

ก่อนใช้งาน โปรดตรวจสอบชนิดของตัวอย่างและเงื่อนไขการทำเวสเทิร์นบล็อตที่แนะนำ รายละเอียดเล็กๆ น้อยๆ เช่น ชนิดของโฮสต์หรือการเจือจาง อาจส่งผลต่อผลลัพธ์ว่าบล็อตสะอาดหรือมีพื้นหลังปนเปื้อนหรือไม่

แอนติบอดีโพลีโคลนอล COX4I1

นอกจากนี้ Solarbio ยังจัดจำหน่ายผลิตภัณฑ์แอนติบอดีโพลีโคลนอลต่อต้าน COX4I1 หลายรายการ รวมถึง K107160P, K110107P, K004618P และ K007906P ด้วย

แอนติบอดีแบบโพลีโคลนอลสามารถจดจำอีพิโทปหลายตำแหน่งบนโปรตีนเดียวกันได้

วิธีนี้อาจมีประโยชน์เมื่ออีพิโทปหนึ่งได้รับผลกระทบเพียงบางส่วนจากการเตรียมตัวอย่าง ในบางกรณี แอนติบอดีแบบโพลีโคลนอลยังให้สัญญาณที่แรงกว่าอีกด้วย

ไม่มีกฎตายตัวที่บอกว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีดีกว่าเสมอไป หรือโพลีโคลนอลแอนติบอดีดีกว่าเสมอไป สิ่งสำคัญคือเวสเทิร์นบล็อตของตัวอย่างที่สะอาดกว่าต่างหาก

แอนติบอดี COX IV แบบรีคอมบิแนนท์

K011748RR Anti-COX IV Recombinant Antibody เป็นอีกทางเลือกหนึ่ง

แอนติบอดีรีคอมบิแนนท์ได้มาจากลำดับกรดอะมิโนของแอนติบอดีที่กำหนดไว้ สำหรับโครงการที่ดำเนินการในระยะยาว วิธีนี้จะมีประโยชน์เมื่อการผลิตแอนติบอดีที่สม่ำเสมอเป็นสิ่งสำคัญ

Solarbio ยังให้บริการเพิ่มเติมอีกด้วย บริการผลิตแอนติบอดีและโปรตีนตามสั่ง สำหรับโครงการที่เกี่ยวข้องกับการพัฒนาแอนติบอดี โปรตีนรีคอมบิแนนท์ เปปไทด์ และวัสดุวิจัยอื่นๆ

จะปรับปรุงผลลัพธ์การตรวจ Western Blot ของ COX4I1 ได้อย่างไร?

แถบ COX4I1 ที่ดูไม่เรียบร้อยไม่ได้หมายความว่าเป็นปัญหาจากแอนติบอดีเสมอไป

บางครั้งตัวอย่างอาจมีความไม่สม่ำเสมอก่อนที่จะนำไปใส่ในเจล บางครั้งโปรตีนอาจถ่ายโอนไปไกลเกินไป บางครั้งความเข้มข้นของแอนติบอดีก็สูงเกินไป

การตรวจสอบทีละจุดมักได้ผลดีกว่าการเปลี่ยนทุกอย่างพร้อมกัน

เริ่มต้นด้วยการเก็บตัวอย่างไมโตคอนเดรียอย่างสม่ำเสมอ

เตรียมส่วนประกอบไมโตคอนเดรียแต่ละส่วนด้วยวิธีเดียวกัน

หากตัวอย่างควบคุมสะอาด แต่ตัวอย่างที่ผ่านการบำบัดมีการปนเปื้อนของไซโตพลาสซึมมากขึ้น การเปรียบเทียบขั้นสุดท้ายก็จะอ่อนแอลงแล้ว

ควรวัดความเข้มข้นของโปรตีนก่อนทำการโหลดด้วย

ปริมาณไมโครลิตรที่เท่ากันไม่ได้หมายความว่าปริมาณโปรตีนจะเท่ากัน ชุดทดสอบโปรตีน PC0020 BCA สามารถใช้ตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีนก่อนทำการ SDS-PAGE เพื่อให้ปริมาณการโหลดขึ้นอยู่กับปริมาณโปรตีน ไม่ใช่ปริมาตรของตัวอย่าง

ฟังดูเหมือนเรื่องพื้นฐาน แต่เป็นหนึ่งในสิ่งแรกๆ ที่ควรตรวจสอบเมื่อวงดนตรีดูเล่นไม่สม่ำเสมอ

ปรับเงื่อนไขการถ่ายโอนและแอนติบอดี

COX4I1 มีขนาดเล็ก ประมาณ 18 กิโลดาลตัน

หากสภาวะการถ่ายโอนรุนแรงเกินไปหรือใช้เวลานานเกินไป โปรตีนบางส่วนอาจทะลุผ่านเยื่อหุ้มเซลล์หรืออาจไม่คงอยู่ในตำแหน่งที่คาดหวังไว้

ดังนั้น หากแถบ COX4I1 อ่อน อย่าเพิ่งโทษแอนติบอดีทันที ตรวจสอบเวลาในการถ่ายโอนและสภาพของเมมเบรนด้วย

เช่นเดียวกับการเจือจางแอนติบอดีหลัก ยิ่งมีแอนติบอดีมากเท่าไร ก็ยิ่งมีสัญญาณรบกวนมากขึ้นเท่านั้น ไม่ได้หมายความว่าจะได้สัญญาณที่มีประโยชน์มากขึ้นเสมอไป

การทดสอบเล็กๆ ด้วยการเจือจางสองหรือสามระดับ สามารถแสดงให้เห็นได้อย่างรวดเร็วว่าความเข้มข้นใดให้แถบที่ชัดเจนที่สุด

รักษาความสม่ำเสมอของขั้นตอนการตรวจจับ

การวิเคราะห์ด้วยวิธี Western blot จะได้ผลดีกว่าเมื่อขั้นตอนไม่น่าเบื่อ

ควรใช้ปริมาณการโหลด สภาพเจล เวลาการถ่ายโอน วิธีการบล็อก การบ่มแอนติบอดี การล้าง การเปิดรับแสง ECL และการตั้งค่าการถ่ายภาพที่เหมือนกันในทุกกลุ่มที่คุณต้องการเปรียบเทียบ

ผลิตภัณฑ์ที่รองรับขั้นตอนการทำงานนี้ ได้แก่ SE134-K แอนติบอดีแพะต่อกระต่าย IgG-HRP, SE131-K แอนติบอดี IgG ต่อต้านเมาส์จากแพะที่เชื่อมต่อกับ HRP, PR1910 ตัวบ่งชี้โปรตีนแบบผสมสี (11–180 kDa)ชุดตรวจเวสเทิร์นบล็อต SWBT PE0010 สารตั้งต้นสำหรับการทำเวสเทิร์นบล็อตติ้งแบบ ECL, ชุดเจล SDS-PAGE P1200และ P1015 4× Protein Loading Buffer with DTT

นอกจากนี้ Solarbio ยังเผยแพร่เนื้อหาเกี่ยวกับแอนติบอดีและการใช้งานในห้องปฏิบัติการในเว็บไซต์ของตนด้วย ส่วนข่าววิจัย.

ข้อสรุป

COX4I1 ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในฐานะตัวควบคุมปริมาณโปรตีนในไมโทคอนเดรีย เนื่องจากมันตั้งอยู่ในเยื่อหุ้มชั้นในของไมโทคอนเดรีย และโดยปกติจะให้แถบโปรตีนที่ชัดเจนในการวิเคราะห์ด้วยวิธี Western blot ที่ขนาดประมาณ 18 kDa

วิธีนี้ได้ผลดีเป็นพิเศษเมื่อตัวอย่างเป็นส่วนประกอบของไมโทคอนเดรีย และโปรตีนเป้าหมายก็มาจากไมโทคอนเดรียเช่นกัน

อย่างไรก็ตาม ควรตรวจสอบข้อมูลทางชีววิทยาก่อน

หากการรักษาของคุณทำให้มวลของไมโทคอนเดรีย การทำงานของห่วงโซ่การหายใจ คอมเพล็กซ์ IV หรือการแสดงออกของ COX4I1 เปลี่ยนแปลงไป โปรตีนนี้อาจไม่เสถียรเพียงพอที่จะกลับสู่สภาวะปกติได้อีกต่อไป

แอนติบอดีควรตรงกับการทดลองจริงด้วย แอนติบอดี COX4I1 แบบโมโนโคลนอล โพลีโคลนอล และรีคอมบิแนนท์ ล้วนใช้ได้ แต่ความเข้ากันได้กับสายพันธุ์และประสิทธิภาพของเวสเทิร์นบล็อตมีความสำคัญมากกว่าฉลากบนรูปแบบการทดสอบ

หากต้องการความช่วยเหลือในการคัดเลือกแอนติบอดี COX4I1 หรือสารเคมีที่เกี่ยวข้องสำหรับการทำ Western blot นักวิจัยสามารถติดต่อได้ ติดต่อ Solarbio โดยระบุชนิดของสิ่งมีชีวิต ประเภทตัวอย่าง เป้าหมาย และการใช้งานที่วางแผนไว้

คำถามที่พบบ่อย

สามารถใช้ COX4I1 เป็นตัวควบคุมปริมาณสารตั้งต้นในการวิเคราะห์ Western blot ได้หรือไม่?

ใช่แล้ว COX4I1 มักถูกใช้เป็นตัวควบคุมปริมาณไมโทคอนเดรีย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาเกี่ยวกับส่วนประกอบของไมโทคอนเดรียและโปรตีนในไมโทคอนเดรีย

COX4I1 ดีกว่า GAPDH สำหรับตัวอย่างไมโทคอนเดรียหรือไม่?

COX4I1 มักเหมาะสมกว่าสำหรับตัวอย่างไมโทคอนเดรียที่ผ่านการทำให้เข้มข้น เนื่องจากเป็นโปรตีนของเยื่อหุ้มชั้นในของไมโทคอนเดรีย ในขณะที่ GAPDH ส่วนใหญ่ใช้สำหรับตัวอย่างไซโทพลาสซึมหรือตัวอย่างเซลล์ทั้งหมด

การแสดงออกของยีน COX4I1 สามารถเปลี่ยนแปลงได้ในระหว่างการทดลองหรือไม่?

ใช่แล้ว COX4I1 อาจเปลี่ยนแปลงได้เมื่อการรักษามีผลต่อมวลของไมโทคอนเดรีย การฟอสฟอริเลชันแบบออกซิเดชัน คอมเพล็กซ์ IV หรือกิจกรรมของห่วงโซ่การหายใจ ควรตรวจสอบความเสถียรของมันก่อนที่จะปรับให้เป็นค่าปกติ

ฉันควรเลือกแอนติบอดี COX4I1 ชนิดโมโนโคลนอลหรือโพลีโคลนอลดี?

ทั้งสองแบบสามารถใช้งานได้ แอนติบอดีโมโนโคลนอลจะจดจำอีพิโทปที่กำหนดไว้เพียงหนึ่งเดียว ในขณะที่แอนติบอดีโพลีโคลนอลจะจดจำได้หลายอีพิโทป สำหรับการวิเคราะห์ด้วยวิธีเวสเทิร์นบลอต ความเข้ากันได้ของสายพันธุ์ ชนิดของตัวอย่าง ข้อมูลการตรวจสอบ และคุณภาพของแถบโปรตีน เป็นจุดเลือกใช้ที่มีประโยชน์มากกว่ารูปแบบของแอนติบอดีเพียงอย่างเดียว