คู่มือการแช่แข็งเซลล์: วิธีการแช่แข็งเซลล์และเก็บรักษาเซลล์สำรองให้ปลอดภัย

ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ การถ่ายเซลล์เป็นเวลานานอาจทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงลักษณะทางฟีโนไทป์ที่เกี่ยวข้องกับภาวะชราภาพ ส่งผลให้ลดอัตราการเพิ่มจำนวนเซลล์ เปลี่ยนแปลงการแสดงออกของเครื่องหมายบนพื้นผิวเซลล์ และลดความสามารถในการทำซ้ำของการทดลองอย่างมาก การปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา และไมโคพลาสมาที่ซ่อนตัวอยู่มักแพร่กระจายโดยไม่มีสัญญาณเตือนใดๆ นอกจากนี้ เหตุการณ์ที่ไม่คาดฝัน เช่น ไฟฟ้าดับ ความผิดพลาดในการเตรียมอาหารเลี้ยงเซลล์ และการดูดหรือทิ้งอาหารเลี้ยงเซลล์โดยไม่ตั้งใจ เกิดขึ้นบ่อยและยากที่จะป้องกัน

การแช่แข็งเซลล์ช่วยให้ห้องปฏิบัติการมีโอกาสครั้งที่สอง ช่วยให้เซลล์ในระยะเริ่มต้นยังคงใช้งานได้ ป้องกันเซลล์ที่มีประโยชน์จากความเสี่ยงในการเพาะเลี้ยงในแต่ละวัน และช่วยให้นักวิจัยสามารถทำการทดลองซ้ำได้โดยมีจุดเริ่มต้นที่เสถียรมากขึ้น

Solarbio จัดหาผลิตภัณฑ์คุณภาพสูง เช่น สารเคมี ชุดวิจัย วัสดุสิ้นเปลืองในห้องปฏิบัติการ และเครื่องมือวิจัยสำหรับการวิจัยด้านชีววิทยาของเซลล์ ภูมิคุ้มกันวิทยา ชีววิทยาระดับโมเลกุล และชีวเคมี ให้แก่ห้องปฏิบัติการวิจัยด้านวิทยาศาสตร์ชีวภาพทั่วโลก สำหรับนักวิจัยที่ต้องการดูผลิตภัณฑ์ที่ใช้ในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์และการแช่แข็งเซลล์ โปรดเยี่ยมชมเว็บไซต์ของเรา แพลตฟอร์มผลิตภัณฑ์ Solarbio.

เหตุใดการแช่แข็งเซลล์จึงคุ้มค่าที่จะทำตั้งแต่เนิ่นๆ

ช่วยลดการเสื่อมสภาพของเซลล์และการเปลี่ยนแปลงลักษณะทางฟีโนไทป์

เซลล์ไม่ได้คงสภาพเดิมตลอดไป หลังจากเพาะเลี้ยงซ้ำหลายครั้ง เซลล์บางสายพันธุ์อาจเริ่มเปลี่ยนแปลง อัตราการเจริญเติบโตอาจช้าลง รูปร่างอาจดูแตกต่างไปเล็กน้อย การแสดงออกของเครื่องหมายหรือการตอบสนองต่อการรักษาก็อาจเปลี่ยนแปลงไปเช่นกัน บางครั้งการเปลี่ยนแปลงอาจเล็กน้อย แต่ก็มากพอที่จะส่งผลต่อความสามารถในการเพาะเลี้ยงซ้ำได้

ด้วยเหตุนี้ห้องปฏิบัติการหลายแห่งจึงแช่แข็งเซลล์ใหม่ในระยะเริ่มต้นของการเพาะเลี้ยง สำหรับเซลล์สายพันธุ์ใหม่ที่ได้รับมา มักจะดีกว่าที่จะเตรียมเซลล์ต้นแบบภายใน 5 รอบการเพาะเลี้ยงแรก หากเซลล์เจริญเติบโตได้ดี วิธีนี้จะช่วยให้ห้องปฏิบัติการมีเซลล์สำรองที่สะอาดกว่า ก่อนที่การจัดการมากเกินไปจะเปลี่ยนแปลงสภาพของเซลล์

สำหรับห้องปฏิบัติการที่สร้างกระบวนการวิจัยแบบครบวงจรโดยใช้แบบจำลองเซลล์นั้น ศูนย์โซลูชันโซลาร์ไบโอ สามารถใช้เป็นจุดอ้างอิงสำหรับการเลือกสารเคมีและการวางแผนการทดลองที่เกี่ยวข้องได้

ช่วยปกป้องงานของคุณจากการปนเปื้อน

การปนเปื้อนเป็นเรื่องที่น่าปวดใจ เพราะมักทำให้เสียขวดเพาะเลี้ยงมากกว่าหนึ่งขวด แบคทีเรียและเชื้อราอาจมองเห็นได้ง่าย แต่ไมโคพลาสมาสามารถซ่อนตัวอยู่ได้ระยะหนึ่ง เมื่อการปนเปื้อนแพร่กระจายแล้ว การรักษาเชื้อเพาะเลี้ยงไว้มักไม่คุ้มกับความเสี่ยง

การเก็บรักษาเซลล์แช่แข็งไม่ได้ทดแทนการจัดการที่สะอาด แต่ช่วยให้คุณสามารถกู้คืนเซลล์ได้ หากเซลล์เพาะเลี้ยงตาย การเก็บรักษาในหลอดแช่แข็งที่สะอาดจะช่วยให้สามารถเริ่มต้นการทำงานใหม่ได้อย่างรวดเร็ว ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งเมื่อเซลล์สายพันธุ์นั้นมีราคาแพง หาได้ยาก หรือเกี่ยวข้องกับโครงการระยะยาว

มันช่วยสร้างระบบสำรองให้กับห้องปฏิบัติการเมื่อเกิดอุบัติเหตุ

การเพาะเลี้ยงเซลล์ขึ้นอยู่กับคน อุปกรณ์ เวลา และนิสัยเล็กๆ น้อยๆ ในแต่ละวัน ไฟฟ้าดับ ความผิดพลาดของอาหารเลี้ยงเซลล์ การข้ามขั้นตอนการถ่ายเซลล์ หรือการวางขวดเพาะเลี้ยงไว้นอกตู้อบเป็นเวลานานเกินไป ล้วนอาจนำไปสู่การสูญเสียเซลล์ได้

แผนการเก็บรักษาเซลล์ด้วยวิธีแช่แข็งที่ดีจะช่วยรักษาเซลล์สำคัญให้อยู่พ้นจากความเสี่ยงในแต่ละวัน หลอดบรรจุเซลล์แช่แข็งจึงไม่ใช่แค่ตัวอย่างสำรอง แต่เป็นสำเนาที่ห้องปฏิบัติการเก็บรักษาไว้

วิธีตรวจสอบว่าเซลล์พร้อมสำหรับการแช่แข็งหรือไม่

ใช้เซลล์ในระยะการเจริญเติบโตที่สมบูรณ์

เซลล์ที่ดีที่สุดสำหรับการแช่แข็งมักอยู่ในช่วงการเจริญเติบโตแบบลอการิทึม สำหรับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ยึดเกาะได้ดีหลายชนิด ความหนาแน่นประมาณ 80-90% ถือเป็นช่วงที่เหมาะสม เซลล์ควรมีลักษณะปกติเมื่อมองผ่านกล้องจุลทรรศน์ ยึดเกาะหรือลอยตัวได้ตามที่คาดไว้ และเจริญเติบโตในอัตราคงที่

เซลล์ควรมีชีวิตรอดได้มากกว่า 90% ก่อนนำไปแช่แข็ง หากเซลล์อ่อนแออยู่แล้วก่อนการเก็บรักษา การฟื้นตัวหลังการละลายจะไม่ดี การแช่แข็งไม่ได้ช่วยซ่อมแซมเซลล์ที่เสียหาย แต่เป็นการรักษาสภาพเดิมก่อนนำไปแช่แข็งเท่านั้น

เซลล์ที่เหมาะสำหรับการแช่แข็งคือเซลล์ที่มีรูปร่างปกติ เจริญเติบโตอย่างสม่ำเสมอ มีอัตราการรอดชีวิตสูง และไม่ปนเปื้อนด้วยแบคทีเรีย เชื้อรา หรือไมโคพลาสมา หากพบว่าเซลล์เพาะเลี้ยงมีสภาพไม่แน่นอน ควรทำการทดสอบหรือเพาะเลี้ยงซ้ำอีกครั้งแทนที่จะรีบนำไปแช่แข็ง

นักวิจัยที่ทำงานเกี่ยวกับแบบจำลองเซลล์และการทดสอบขั้นปลายสามารถเรียกดูข้อมูลได้ แหล่งข้อมูลเส้นทาง Solarbio เมื่อเชื่อมโยงงานวิจัยด้านการเพาะเลี้ยงเซลล์เข้ากับการศึกษาเชิงกลไกในภายหลัง

ห้ามแช่แข็งเซลล์ที่เครียดหรือไม่เสถียร

เซลล์บางชนิดไม่ควรนำไปแช่แข็ง ตัวอย่างเช่น เซลล์ที่หนาแน่นเกินไป เมื่อเซลล์อยู่กันอย่างหนาแน่นเกินไป เซลล์อาจเข้าสู่ระยะหยุดการแบ่งตัว และเซลล์ที่หลุดออกมาเป็นแผ่นหรือลอยเป็นก้อนก็ไม่เหมาะสมสำหรับการแช่แข็งเช่นกัน

เซลล์ที่ละลายแล้วไม่ควรนำไปแช่แข็งซ้ำทันที เซลล์ต้องการเวลาในการฟื้นตัว ในงานประจำส่วนใหญ่ การเพาะเลี้ยงเซลล์หนึ่งหรือสองครั้งก่อนเตรียมสต็อกแช่แข็งใหม่จะปลอดภัยกว่า

เซลล์ที่ถูกย่อยมากเกินไปเป็นอีกปัญหาหนึ่ง หากใช้เอนไซม์ทริปซินนานเกินไปหรือใช้ปิเปตแรงเกินไป สภาพของเซลล์อาจเสียหายไปแล้ว ลักษณะรูปร่างที่ผิดปกติ การเจริญเติบโตที่ช้าลงอย่างกะทันหัน และเศษซากจำนวนมาก ควรได้รับการพิจารณาว่าเป็นสัญญาณเตือน

สำหรับสารเคมีที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ สารละลายสำหรับการย่อย และวัสดุสิ้นเปลืองที่เกี่ยวข้อง ห้องปฏิบัติการสามารถใช้... เว็บไซต์ Solarbio ทั่วโลก เพื่อตรวจสอบหมวดหมู่ผลิตภัณฑ์ที่มีจำหน่ายและข้อมูลการสนับสนุน

การเลือกสารละลายแช่แข็งที่เหมาะสม

ความเสียหายที่แท้จริงเกิดจากผลึกน้ำแข็ง

โดยหลักแล้วเซลล์ไม่ได้กลัวความเย็น อันตรายที่แท้จริงคือการก่อตัวของผลึกน้ำแข็งในระหว่างการแช่แข็ง ผลึกน้ำแข็งขนาดใหญ่สามารถทำลายเยื่อหุ้มเซลล์และโครงสร้างภายในได้ เมื่อเกิดเหตุการณ์เช่นนั้นแล้ว การละลายในภายหลังไม่สามารถซ่อมแซมความเสียหายได้อย่างสมบูรณ์

สารละลายสำหรับการแช่แข็งเซลล์ช่วยให้เซลล์สูญเสียน้ำช้าลงและลดความเสียหายจากผลึกน้ำแข็ง DMSO ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพราะสามารถเข้าไปในเซลล์และปกป้องเซลล์ระหว่างการแช่แข็งได้ ปัญหาคือ DMSO ก็มีพิษเช่นกัน ดังนั้นเซลล์ไม่ควรอยู่ในอุณหภูมิห้องนานเกินไปหลังจากเติม DMSO ลงไปแล้ว

สูตรทั่วไปที่ใช้ในห้องปฏิบัติการ

สำหรับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมส่วนใหญ่ สารละลายแช่แข็งแบบคลาสสิกคือ FBS 90% ผสมกับ DMSO 10% สารละลายนี้เรียบง่าย คุ้นเคย และใช้ได้กับเซลล์หลายชนิดที่ใช้กันทั่วไป

สำหรับเซลล์ภูมิคุ้มกันบางชนิด อัตราส่วนของซีรัมอาจมีการปรับเล็กน้อย เช่น FBS 92% ผสมกับ DMSO 8% ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับโปรโตคอลของห้องปฏิบัติการและชนิดของเซลล์

ทางเลือกที่ประหยัดต้นทุนกว่าคือ การใช้ FBS 50%, สารอาหารเลี้ยงเซลล์ครบถ้วน 40% และ DMSO 10% สูตรนี้อาจใช้ได้ผลกับเซลล์สายพันธุ์ที่แข็งแรงกว่า แต่การฟื้นตัวอาจอ่อนกว่าสูตรดั้งเดิมที่มีซีรัมเข้มข้น

สำหรับระบบเพาะเลี้ยงแบบปราศจากซีรั่ม สารละลายสำหรับการแช่แข็งแบบปราศจากซีรั่มเชิงพาณิชย์มักเป็นตัวเลือกที่ดีกว่า ช่วยลดความแปรปรวนของซีรั่มแต่ละชุด และเหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการที่ต้องการระบบที่มีความชัดเจนมากขึ้น หากทีมต้องการความช่วยเหลือในการเปรียบเทียบระบบรีเอเจนต์หรือการสร้างขั้นตอนการทำงานที่ทำซ้ำได้ หน้าบริการ Solarbio เป็นจุดเริ่มต้นที่มีประโยชน์

ตัวเลือกสารละลายสำหรับการแช่แข็งเซลล์ของ Solarbio สำหรับความต้องการในการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่แตกต่างกัน

สำหรับการจัดเก็บเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมตามปกติ สารละลายสำหรับการแช่แข็งแบบ Solarbio สามารถใช้เป็นทางเลือกที่พร้อมใช้งานแทนการเตรียม FBS/DMSO ด้วยตนเอง สำหรับระบบที่ปราศจากซีรั่มที่กำหนดไว้ สารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์แบบปราศจากซีรัม Solarbio (ผสมฟีนอลเรด) ช่วยลดความแปรปรวนของซีรั่มแต่ละชุดในขณะที่ยังคงแสดงค่า pH ด้วยสายตา หากฟีนอลเรดอาจส่งผลต่อการถ่ายภาพหรือการทดสอบแบบใช้สี การแช่แข็งเซลล์แบบปราศจากซีรัม (ปราศจากฟีนอลเรด) เหมาะสมกว่า สำหรับการเพาะเลี้ยงสเต็มเซลล์หรือกระบวนการทำงานที่ไวต่อ DMSO สารละลายสำหรับการแช่แข็งสเต็มเซลล์ (ปราศจาก DMSO) สามารถพิจารณาได้หลังจากตรวจสอบความถูกต้องของการฟื้นตัวแล้ว สำหรับข้อกำหนดที่เข้มงวดมากขึ้นเกี่ยวกับสารที่ปราศจากซีรัม ฟีนอลเรด และ DMSO สารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์แบบปราศจากซีรัม (ปราศจากฟีนอลเรดและ DMSO) เป็นตัวเลือกที่ตรงเป้าหมายที่สุด

การกำหนดความหนาแน่นของเซลล์ให้เหมาะสม

เซลล์จำนวนน้อยเกินไปฟื้นตัวช้า

การฟื้นตัวของเซลล์จากสต็อกแช่แข็งนั้นได้รับผลกระทบจากความหนาแน่นของเซลล์มากกว่าที่นักชีววิทยาหน้าใหม่ส่วนใหญ่ตระหนัก จำนวนเซลล์ที่น้อยมากในหลอดทดลองเดียวอาจหมายถึงการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ "เบาบาง" ซึ่งต้องใช้เวลานานในการเจริญเติบโตกลับมาจนมีความหนาแน่นเต็มที่สำหรับการทดลอง ซึ่งจะทำให้การทำงานล่าช้าอย่างมาก

สำหรับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมส่วนใหญ่ ความหนาแน่นในการแช่แข็งโดยทั่วไปคือ 2–5 × 10⁶ เซลล์/มิลลิลิตร ปริมาตรการแช่แข็งปกติคือ 1 มิลลิลิตร ในหลอดแช่แข็งขนาด 1.8–2 มิลลิลิตร

สำหรับเซลล์ภูมิคุ้มกัน ความหนาแน่นมักจะสูงกว่า โดยปกติจะอยู่ที่ประมาณ 5–10 × 10⁶ เซลล์/มล. เซลล์แขวนลอยอาจต้องปรับอย่างระมัดระวังมากขึ้น เนื่องจากอัตราการฟื้นตัวขึ้นอยู่กับความหนาแน่นเริ่มต้นและสภาพของเซลล์เป็นอย่างมาก

เซลล์มากเกินไปไม่ใช่เรื่องดี

การบรรจุเซลล์จำนวนมากเกินไปในหลอดเดียวก็ไม่ใช่เรื่องที่ดีเช่นกัน สารละลายแช่แข็งอาจไม่สามารถปกป้องเซลล์ทุกเซลล์ได้อย่างทั่วถึง ความเครียดจาก DMSO อาจรุนแรงขึ้น นอกจากนี้ สารแขวนลอยอาจไม่สม่ำเสมอในระหว่างการแบ่งส่วน

ช่างเทคนิคที่มีประสบการณ์หลายคนมักใช้หลักการง่ายๆ สำหรับเซลล์ที่ยึดเกาะพื้นผิวเป็นประจำ โดยทั่วไปแล้ว ขวดเพาะเลี้ยง T25 หนึ่งขวดจะใส่ในหลอดแช่แข็งหนึ่งหลอด และจานเพาะเลี้ยงขนาด 10 ซม. หนึ่งจานจะใส่ในหลอดแช่แข็งสองหลอด นี่ไม่ใช่กฎตายตัว แต่เป็นแนวทางปฏิบัติที่ใช้ได้จริงเมื่อสภาพของเซลล์อยู่ในเกณฑ์ปกติ

สำหรับข้อมูลอัปเดตผลิตภัณฑ์และเนื้อหาการทดลองในห้องปฏิบัติการเชิงปฏิบัติ ผู้อ่านสามารถติดตามได้ ข่าวโซลาร์ไบโอ สำหรับรายละเอียดการสมัครใหม่และข้อมูลบริษัท

ขั้นตอนการปฏิบัติจริงในการแช่แข็งเซลล์

เก็บเกี่ยวเซลล์อย่างอ่อนโยน

เริ่มต้นด้วยเซลล์ที่อยู่ในระยะเจริญเติบโตอย่างแข็งแรง นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออก ล้างหากโปรโตคอลกำหนดไว้ จากนั้นแยกหรือเก็บเซลล์โดยใช้วิธีที่เหมาะสมกับชนิดของเซลล์นั้น ๆ

ควรจัดการกับเซลล์อย่างเบามือ การใช้ปิเปตดูดเซลล์อย่างแรงไม่ได้ช่วยให้กระบวนการเร็วขึ้นแต่อย่างใด มีแต่จะเพิ่มความเครียดให้กับเซลล์เท่านั้น

หลังจากเก็บตัวอย่างแล้ว ให้นำไปปั่นเหวี่ยงด้วยความเร็วต่ำ โดยทั่วไปจะใช้ความเร็ว 1000–1200 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที แต่แต่ละห้องปฏิบัติการควรปรับเวลาตามเครื่องปั่นเหวี่ยงและชนิดของเซลล์ หลังจากปั่นเหวี่ยงแล้ว ให้แยกส่วนของเหลวใสออกอย่างระมัดระวังโดยไม่ให้ตะกอนถูกรบกวน

ผสมให้เข้ากันและแบ่งส่วนโดยไม่ชักช้า

เติมสารละลายแช่แข็งที่เตรียมไว้แล้วลงไป และคนตะกอนให้เข้ากันอย่างสม่ำเสมอ หลีกเลี่ยงการเขย่าด้วยเครื่องปั่นเหวี่ยง เมื่อ DMSO สัมผัสกับเซลล์แล้ว ห้ามทิ้งสารละลายไว้ที่อุณหภูมิห้องนานเกินไป

แบ่งสารละลายแขวนลอยลงในหลอดแช่แข็งที่มีฉลากกำกับ โดยปกติหลอดละ 1 มิลลิลิตร หากใช้สารแช่แข็งเชิงพาณิชย์ ให้ปฏิบัติตามคำแนะนำของผลิตภัณฑ์แทนการผสมวิธีการต่างๆ จากโปรโตคอลที่แตกต่างกัน

การติดฉลากที่ชัดเจนมีความสำคัญ แต่ละหลอดควรแสดงชื่อสายเซลล์ หมายเลขการเพาะเลี้ยง วันที่แช่แข็ง และรหัสผู้ดำเนินการหรือรหัสโครงการ เซลล์ที่ยังใช้งานได้อาจกลายเป็นเซลล์ที่ไร้ประโยชน์หากไม่มีใครสามารถระบุได้ในภายหลัง

สำหรับข้อมูลพื้นฐานของบริษัท ข้อมูลระบบคุณภาพ และขอบเขตของผลิตภัณฑ์ ผู้อ่านสามารถเยี่ยมชมได้ที่ [ลิงก์เว็บไซต์] หน้าเกี่ยวกับ Solarbio.

การทำความเย็นและการจัดเก็บระยะยาว

การระบายความร้อนแบบควบคุมนั้นปลอดภัยกว่า

อัตราการทำความเย็นที่เหมาะสมคือประมาณ -1°C ต่อนาที จนกว่าตัวอย่างจะถึง -80°C ห้องปฏิบัติการหลายแห่งใช้ภาชนะแช่แข็งไอโซโพรพานอลหรือกล่องแช่แข็งแบบควบคุมอัตราสำหรับขั้นตอนนี้ วิธีนี้ง่ายและเชื่อถือได้เพียงพอสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ในงานประจำ

ห้องปฏิบัติการบางแห่งใช้วิธีการลดอุณหภูมิแบบทีละขั้นตอน โดยย้ายตัวอย่างจาก 4°C ไปยัง -20°C จากนั้นไปยัง -80°C ในช่วงข้ามคืน วิธีนี้อาจได้ผล แต่ขึ้นอยู่กับจังหวะเวลาและวิธีการทำงานของผู้ปฏิบัติงานเป็นหลัก

การถ่ายโอนโดยตรงไปยังอุณหภูมิ -80°C นั้นเหมาะสมเฉพาะเมื่อสารละลายสำหรับการแช่แข็งเชิงพาณิชย์ระบุไว้อย่างชัดเจนว่าวิธีการนี้ใช้ได้ หากสารละลายไม่ได้ออกแบบมาสำหรับการแช่แข็งโดยตรง ความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์อาจลดลงอย่างมาก

ไนโตรเจนเหลวใช้สำหรับเก็บรักษาในระยะยาว

อุณหภูมิ -80°C มักใช้เป็นขั้นตอนการเปลี่ยนผ่าน ไม่ใช่สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเก็บรักษาเซลล์ที่มีค่าในระยะยาว หลังจากแช่เย็นข้ามคืนแล้ว ควรย้ายหลอดแช่แข็งไปยังไนโตรเจนเหลวเพื่อการเก็บรักษาที่เสถียร

การเก็บรักษาเซลล์ด้วยไนโตรเจนเหลวในรูปไอเป็นวิธีที่ใช้บ่อยในการลดความเสี่ยงจากการปนเปื้อนและรักษาอุณหภูมิให้ต่ำมาก สำหรับธนาคารเซลล์ที่สำคัญ ควรตรวจสอบบันทึกการเก็บรักษาอย่างสม่ำเสมอ

หากห้องปฏิบัติการต้องการความช่วยเหลือในการเลือกสารเคมี การจัดทำเอกสาร หรือการสื่อสารทางเทคนิค... หน้าติดต่อของ Solarbio สามารถใช้เพื่อติดต่อทีมได้

สิ่งที่น่าดูหลังจากน้ำแข็งละลาย

อัตราการรอดชีวิตต่ำมักเริ่มต้นก่อนการแช่แข็ง

เมื่อเซลล์ฟื้นตัวได้ไม่ดีหลังจากละลายน้ำแข็ง ปัญหาอาจไม่ได้อยู่ที่ขั้นตอนการละลายน้ำแข็งเสมอไป หลายปัญหาเริ่มต้นก่อนการแช่แข็งเสียด้วยซ้ำ เช่น เซลล์เพาะเลี้ยงเดิมอาจเก่าเกินไป แออัดเกินไป ปนเปื้อน ย่อยมากเกินไป หรือสัมผัสกับ DMSO นานเกินไป

โดยทั่วไปแล้วควรใช้วิธีละลายน้ำแข็งอย่างรวดเร็ว อุ่นหลอดทดลองอย่างรวดเร็วในอ่างน้ำอุ่น 37°C จนเหลือเพียงผลึกน้ำแข็งเล็กน้อย จากนั้นย้ายเซลล์ไปยังอาหารเลี้ยงเซลล์ที่อุ่นไว้แล้ว เซลล์ที่ไวต่อสารละลายอาจต้องกำจัด DMSO ออกโดยการปั่นเหวี่ยงหลังจากเจือจางแล้ว

ให้เวลาเซลล์ได้ฟื้นตัว

เซลล์ที่เพิ่งละลายน้ำแข็งอาจเจริญเติบโตช้าในตอนแรก ซึ่งไม่ได้หมายความว่าเซลล์ล้มเหลวเสมอไป เซลล์หลายชนิดต้องการเวลา 24-72 ชั่วโมงในการฟื้นตัวจากความเครียดจากการแช่แข็ง

อย่ารีบร้อนเริ่มทำการทดลองอย่างเป็นทางการโดยตรง เว้นแต่ว่าระเบียบวิธีการทดลองจะอนุญาตไว้แล้ว หากเป็นไปได้ ควรทำการเพาะเลี้ยงเซลล์หนึ่งหรือสองครั้งก่อนเก็บข้อมูลสำคัญ

ข้อสรุป

การแช่แข็งเซลล์ไม่ใช่เรื่องซับซ้อน แต่รายละเอียดเล็กๆ น้อยๆ มีความสำคัญ เซลล์ที่แข็งแรง สารละลายแช่แข็งที่เหมาะสม ความหนาแน่นที่ถูกต้อง การจัดการอย่างรวดเร็วหลังจากเติม DMSO การควบคุมอุณหภูมิ และการเก็บรักษาด้วยไนโตรเจนเหลว ล้วนส่งผลต่อการฟื้นตัวของเซลล์

สำหรับห้องปฏิบัติการทั่วไป การเก็บรักษาเซลล์แช่แข็งช่วยประหยัดเวลาและค่าใช้จ่าย สำหรับงานวิจัยระยะยาว ช่วยให้ได้ผลลัพธ์ที่สม่ำเสมอ สำหรับทีมที่จัดการกับเซลล์สายพันธุ์ที่มีค่าหรือหาทดแทนได้ยาก การเก็บรักษาเซลล์แช่แข็งเป็นส่วนหนึ่งของแผนการทดลอง ไม่ใช่สิ่งที่นึกถึงทีหลัง

Solarbio ให้บริการเครื่องมือวิจัยด้านวิทยาศาสตร์ชีวภาพครอบคลุมสาขาชีววิทยาของเซลล์ ภูมิคุ้มกันวิทยา ชีววิทยาระดับโมเลกุล และชีวเคมี เมื่อต้องการสร้างกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีเสถียรภาพมากขึ้น ควรตรวจสอบผลิตภัณฑ์และบริการที่เกี่ยวข้องของ Solarbio ก่อนเตรียมธนาคารเซลล์ครั้งต่อไป

คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: เวลาใดเหมาะสมที่สุดสำหรับการแช่แข็งเซลล์?
A1: ช่วงเวลาที่ดีที่สุดคือช่วงที่เซลล์อยู่ในระยะการเจริญเติบโตแบบลอการิทึม สำหรับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ยึดเกาะพื้นผิวหลายชนิด ความหนาแน่นประมาณ 80-90% ถือเป็นช่วงที่ดี

คำถามที่ 2: ควรพิจารณาความมีชีวิตของเซลล์ในระดับใดก่อนทำการแช่แข็งเซลล์?
A2: โดยทั่วไปแล้วอัตราการรอดชีวิตควรสูงกว่า 90% เซลล์ที่อ่อนแอก่อนการแช่แข็งมักจะฟื้นตัวได้ไม่ดีหลังจากละลาย

คำถามที่ 3: เซลล์ที่ละลายแล้วสามารถนำไปแช่แข็งอีกครั้งได้ทันทีหรือไม่?
A3: ไม่ควรทำอย่างนั้นจะดีกว่า เซลล์ที่เพิ่งละลายน้ำแข็งควรพักตัวและแช่แข็งสักหนึ่งหรือสองครั้งก่อนที่จะแช่แข็งอีกครั้ง

คำถามที่ 4: เหตุใดจึงใช้ DMSO ในสารละลายแช่แข็ง?
A4: DMSO ช่วยลดความเสียหายจากผลึกน้ำแข็งระหว่างการแช่แข็ง ช่วยปกป้องเซลล์ระหว่างการทำความเย็น แต่การสัมผัสเป็นเวลานานที่อุณหภูมิห้องอาจเป็นอันตรายต่อเซลล์ได้

Q5: สูตรของสารละลายแช่แข็งที่ใช้กันทั่วไปสำหรับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมคืออะไร?
A5: สูตรทั่วไปคือ FBS 90% ผสมกับ DMSO 10% บางห้องปฏิบัติการใช้ FBS 50%, สารอาหารเลี้ยงเซลล์ครบถ้วน 40% และ DMSO 10% สำหรับเซลล์สายพันธุ์ที่แข็งแรงกว่า

Q6: ควรใช้ความหนาแน่นเท่าใดในการแช่แข็งเซลล์?
A6: เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมส่วนใหญ่มักถูกแช่แข็งที่ความเข้มข้น 2–5 × 10⁶ เซลล์/มล. เซลล์ภูมิคุ้มกันอาจต้องการความเข้มข้น 5–10 × 10⁶ เซลล์/มล.

Q7: การแช่แข็งโดยตรงที่อุณหภูมิ -80°C สามารถทำได้หรือไม่?
A7: วิธีนี้ยอมรับได้ก็ต่อเมื่อสารละลายที่ใช้ในการแช่แข็งสนับสนุนวิธีการนั้นอย่างชัดเจนเท่านั้น มิเช่นนั้น การควบคุมอุณหภูมิจะปลอดภัยกว่า

Q8: เซลล์ควรอยู่ในอุณหภูมิ -80°C นานเท่าใดก่อนที่จะนำไปเก็บรักษาในไนโตรเจนเหลว?
A8: ห้องปฏิบัติการหลายแห่งเก็บหลอดทดลองไว้ที่อุณหภูมิ -80°C ค้างคืนหลังจากควบคุมอุณหภูมิให้เย็นลง แล้วจึงย้ายไปเก็บในไนโตรเจนเหลวในวันถัดไป

Q9: เหตุใดเซลล์จึงเจริญเติบโตช้าลงหลังจากละลายน้ำแข็ง?
A9: การเจริญเติบโตที่ช้าอาจเกิดจากสภาวะเริ่มต้นที่ไม่ดี ความหนาแน่นในการแช่แข็งต่ำ ความเครียดจาก DMSO การทำความเย็นที่ไม่เสถียร หรือความล่าช้าในการฟื้นตัวตามปกติในเซลล์ที่ไวต่อสภาวะดังกล่าว

Q10: ควรเขียนอะไรลงบนฉลากหลอดแช่แข็ง?
A10: ฉลากควรระบุชื่อสายเซลล์ หมายเลขรอบการเพาะเลี้ยง วันที่แช่แข็ง และรหัสผู้ดำเนินการหรือรหัสโครงการ ฉลากที่ชัดเจนจะช่วยป้องกันความสับสนของตัวอย่างในภายหลัง