คู่มือการปรับปรุงประสิทธิภาพฉบับสมบูรณ์สำหรับโปรโตคอลการย้อมสี Masson Trichrome และข้อผิดพลาดทั่วไปในห้องปฏิบัติการจุลพยาธิวิทยา

ทุกวันเราได้รับคำถามจากห้องปฏิบัติการพยาธิวิทยาจากทั่วโลกเกี่ยวกับปัญหาการย้อมสี Masson trichrome การย้อมสีนี้เป็นหนึ่งในวิธีการที่เชื่อถือได้มากที่สุดในการมองเห็นโครงสร้างของเนื้อเยื่อ แต่ขั้นตอนที่ซับซ้อนหลายขั้นตอนหมายความว่าความแปรปรวนเล็กน้อยอาจทำให้ผลลัพธ์ผิดเพี้ยนไปได้ หากสไลด์ของคุณมีสีแดงมากเกินไป สีน้ำเงินมากเกินไป หรือมีความคมชัดต่ำ คุณไม่ได้อยู่คนเดียว ทีมงานของเราทำงานกับสารเคมีทางด้านจุลพยาธิวิทยาเป็นประจำทุกวัน ดังนั้นเราจึงรวบรวมปัญหาที่พบบ่อยที่สุดจากลูกค้าของเราและนำเสนอวิธีแก้ปัญหาที่ง่ายดายเพื่อให้ขั้นตอนการทำงานของคุณกลับมาเป็นปกติ

ภาพรวมของ Masson Trichrome และฟังก์ชันของส่วนประกอบในชุดอุปกรณ์

วัตถุประสงค์พื้นฐานของการย้อมสีและองค์ประกอบของเนื้อเยื่อที่แตกต่างกัน

หน้าที่หลักของวิธีนี้คือการแยกส่วนต่างๆ ของชิ้นเนื้อภายใต้กล้องจุลทรรศน์ วิธีนี้ให้ความแตกต่างทางสายตาที่ชัดเจนโดยการย้อมสีเส้นใยคอลลาเจนเป็นสีน้ำเงินหรือสีเขียว ทำให้เส้นใยกล้ามเนื้อ ไซโตพลาซึม และเซลล์เม็ดเลือดแดงเป็นสีแดง และทำให้แกนกลางของเซลล์มีสีน้ำตาลเข้มหรือสีดำ ห้องปฏิบัติการต่างๆ อาศัยความแตกต่างนี้อย่างมากในการประเมินพังผืดในเนื้อเยื่อตับหรือไต ศึกษาพยาธิสภาพของกล้ามเนื้อ หรือดูการเปลี่ยนแปลงของเนื้อเยื่อรอบเนื้องอก คุณสามารถติดตามความสัมพันธ์ระหว่างการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาเหล่านี้กับระบบโมเลกุลพื้นฐานได้โดยการเยี่ยมชมเครื่องมือแบบโต้ตอบของเรา แนวทางเส้นทางการส่งสัญญาณ เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพเป้าหมายการวิจัยในวงกว้างของคุณ

สารเคมีหลักและสารตรึงสภาพในชุดอุปกรณ์มาตรฐาน

ส่วนประกอบทุกชิ้นในชุดอุปกรณ์มาตรฐานมีหน้าที่เฉพาะในการสร้างความคมชัดขั้นสุดท้าย สารละลาย Bouin ช่วยตรึงโครงสร้างของเนื้อเยื่อและทำหน้าที่เป็นสารช่วยยึดสีเพื่อเพิ่มการแทรกซึมของสีและความคมชัด ฮีมาทอกซิลินเหล็กของ Weigert จับกับดีเอ็นเอในนิวเคลียสอย่างแน่นหนาและทนต่อขั้นตอนการล้างด้วยกรดในภายหลัง กรดฟุคซินจะกำหนดเป้าหมายโครงสร้างที่หนาแน่น เช่น เส้นใยกล้ามเนื้อเพื่อให้มีสีแดง ในขณะที่กรดฟอสโฟโมลิบดิกจะแยกสีแดงออกจากโครงสร้างที่หลวมกว่าเพื่อเตรียมคอลลาเจนสำหรับการย้อมด้วยแอนิลีนบลู สุดท้าย สารละลายกรดอ่อนทำหน้าที่เป็นสารตรึงเพื่อล็อคทั้งสีแดงและสีน้ำเงินในระหว่างการล้าง ห้องปฏิบัติการที่ปฏิบัติตามขั้นตอนการทำงานแบบดั้งเดิมนี้สามารถเลือกใช้ชุดอุปกรณ์ได้ ชุดน้ำยาย้อมสีไตรโครม G1340 ของ Masson เป็นชุดอุปกรณ์มาตรฐาน

ตัวเลือกการย้อมสีที่ได้รับการปรับปรุงและข้อดีของสีเซเลสทีนบลู

เมื่อเลือกโปรโตคอล คุณมักจะเห็นชุดอุปกรณ์มาตรฐานและเวอร์ชันที่ดัดแปลง เมื่อเปรียบเทียบกับขั้นตอนการทำงานมาตรฐานของ G1340 แล้ว... ชุดน้ำยาย้อมสีไตรโครมของมาสสันแบบดัดแปลง G1346 ใช้สีเซเลสทีนบลูแทนเหล็กฮีมาทอกซิลิน ทำให้ไม่จำเป็นต้องเตรียมสีย้อมนิวเคลียสก่อนใช้งานทันที นอกจากนี้ สูตรที่ปรับปรุงแล้วยังใช้สารช่วยย้อมที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมและไม่เป็นพิษในขั้นตอนการเตรียมการ ซึ่งให้สีที่คมชัดกว่า เส้นใยชัดเจนกว่า และป้องกันการย้อมสีมากเกินไป รูปแบบที่ปรับปรุงแล้วนี้มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับห้องปฏิบัติการที่ต้องการกระบวนการเตรียมที่ง่ายกว่าและคอนทราสต์สีแดง-น้ำเงินที่สม่ำเสมอกว่าในการย้อมสีแต่ละครั้ง

การแก้ไขความไม่สมดุลของการย้อมสีแดงและสีม่วง

ผลกระทบของระยะเวลาการย้อมสีอนิลีนบลูที่สั้น

ปัญหาเรื่องความสมดุลของสีมักเกิดจากระยะเวลาในการแยกสีและการย้อมสีของสีย้อมกรดของคุณ เมื่อสไลด์ที่เสร็จแล้วมีสีม่วงแดงเป็นส่วนใหญ่ และเส้นใยคอลลาเจนสีน้ำเงินดูจางลง โดยทั่วไปแล้วจะมีสาเหตุที่เป็นไปได้สองประการ ประการแรก ขั้นตอนการย้อมด้วยอะนิลีนบลูอาจสั้นเกินไป ทำให้สีย้อมสีแดงเด่นกว่าสีย้อมสีอื่น เพื่อแก้ไขความไม่สมดุลของสีนี้ คุณควรลองเพิ่มระยะเวลาการบ่มด้วยอะนิลีนบลูทีละสามสิบวินาที จนกว่าสีน้ำเงินจะปรากฏชัดเจนขึ้น

การแก้ไขปัญหาการแยกความแตกต่างของกรดฟอสโฟโมลิบดิกที่ไม่เพียงพอ

สาเหตุประการที่สองที่ทำให้สไลด์มีสีม่วงแดงคือ การแยกแยะด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกไม่เพียงพอ หากกรดนี้ไม่อยู่บนสไลด์นานพอ กรดฟุคซินที่ตกค้างจะยังคงติดอยู่ภายในเส้นใยคอลลาเจน ทำให้สีแอนิลีนบลูไม่สามารถจับตัวได้อย่างเหมาะสม การเพิ่มเวลาในการแยกแยะด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกเป็นสองหรือสามนาทีจะช่วยกำจัดสีย้อมสีแดงส่วนเกินและเตรียมโครงสร้างเนื้อเยื่อสำหรับการย้อมสีน้ำเงิน

เทคนิคการล้างอย่างรวดเร็วและการปรับการล้าง

มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยในการจัดการที่สามารถเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมของสีย้อมบนชิ้นเนื้อได้ หากการขยายขั้นตอนการย้อมด้วยแอนิลีนบลูเพียงอย่างเดียวไม่ให้สีน้ำเงินสดใส คุณสามารถเพิ่มขั้นตอนการล้างสั้นๆ ได้ ลองล้างอย่างรวดเร็วด้วยน้ำกลั่นประมาณสามถึงห้าวินาทีทันทีหลังจากขั้นตอนการแยกสีด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกเสร็จสิ้น จากนั้นจึงเข้าสู่สารละลายแอนิลีนบลูทันที การเปลี่ยนแปลงง่ายๆ นี้ช่วยล้างสารเคมีที่ตกค้างและปรับปรุงความคมชัดของสีแดงและสีน้ำเงินในขั้นสุดท้าย

แก้ไขโทนสีฟ้าที่มากเกินไปและบริเวณที่ซีดจาง

การจัดการระยะเวลาการบ่มสีอนิลีนบลูที่ยาวนาน

หากสไลด์ของคุณมีสีน้ำเงินม่วงทั้งหมด และเส้นใยกล้ามเนื้อสีแดงดูหมองหรือถูกปกคลุมจนหมด แสดงว่าคุณกำลังเจอปัญหาตรงกันข้าม การย้อมด้วยอะนิลีนบลูอาจใช้เวลานานเกินไป ทำให้สีเข้มเกินไปและบดบังบริเวณสีแดง คุณสามารถแก้ไขได้โดยการเพิ่มเวลาในการย้อมด้วยกรดฟุคซิน ในขณะที่ลดเวลาในการย้อมอะนิลีนบลูลง เราแนะนำให้เริ่มต้นด้วยเวลาพื้นฐานสองนาทีสำหรับการย้อมสีน้ำเงิน และปรับเปลี่ยนจากนั้นตามภาพที่ได้จากกล้องจุลทรรศน์ในเบื้องต้น

การจัดการกับความแตกต่างจากการสัมผัสกรดมากเกินไป

การใช้กรดฟอสโฟโมลิบดิกในการแยกเซลล์มากเกินไปจะทำให้สีย้อมสีแดงหลุดออกจากเส้นใยกล้ามเนื้ออย่างรุนแรง จนกระทั่งสีย้อมสีน้ำเงินที่ตามมาครอบคลุมทั้งชิ้นเนื้อ การลดระยะเวลาการแยกเซลล์ด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกให้เหลือเพียงครึ่งนาทีถึงหนึ่งนาทีจะช่วยรักษาสีแดงในไซโตพลาสซึมและโครงสร้างกล้ามเนื้อ การหาช่วงเวลาที่เหมาะสมนี้จะช่วยป้องกันไม่ให้โมเลกุลของสีย้อมอะนิลีนบลูขนาดใหญ่บดบังรายละเอียดของไซโตพลาสซึมจนหมด

การปรับมุมมองเริ่มต้นของกล้องจุลทรรศน์และฐานฟักไข่

เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ห้องปฏิบัติการของคุณต้องการอย่างแม่นยำ การทดสอบเบื้องต้นเพื่อดูว่าเนื้อเยื่อเฉพาะของคุณตอบสนองต่อส่วนประกอบของชุดทดสอบอย่างไร จะช่วยได้มาก การตรวจสอบความสมดุลของสีภายใต้กล้องจุลทรรศน์ตั้งแต่เนิ่นๆ จะช่วยให้คุณตัดสินใจได้อย่างถูกต้องว่าจะปรับอัตราส่วนของสีย้อมหรือไม่ สำหรับทีมที่จัดการกับตัวอย่างพยาธิวิทยาที่มีความเชี่ยวชาญสูงซึ่งต้องการเวลาในการจัดการที่เฉพาะเจาะจง คุณสามารถเรียนรู้เกี่ยวกับความช่วยเหลือแบบกำหนดเองของเราได้ผ่านทางเว็บไซต์ของเรา บริการสนับสนุนการทดลอง เพื่อพัฒนากระบวนการย้อมสีที่เหมาะสมกับแต่ละบุคคล

การเพิ่มประสิทธิภาพการย้อมสีสำหรับชิ้นเนื้อแช่แข็งและชิ้นเนื้อพาราฟิน

การปรับระยะเวลาการย้อมสีสำหรับเนื้อเยื่อแช่แข็ง

ตัวอย่างพาราฟินและตัวอย่างแช่แข็งมีการดูดซับสีย้อมแตกต่างกันอย่างมาก เนื่องจากวิธีการเตรียมเนื้อเยื่อและความหนาของชิ้นเนื้อที่ตัด ชิ้นเนื้อแช่แข็งจะดูดซับสีย้อมได้เร็วกว่าชิ้นเนื้อพาราฟิน เนื่องจากอวัยวะแต่ละชนิดมีอัตราการย้อมสีที่แตกต่างกัน คุณจึงต้องปรับเวลาการบ่มอย่างระมัดระวัง หากคุณทำงานกับเนื้อเยื่อที่ย้อมสีเข้มเกินไปได้ง่าย ให้ลดระยะเวลาในทุกขั้นตอนลงครึ่งหนึ่งเพื่อป้องกันไม่ให้สีเข้มเกินไป

วิธีการเจือจางสีอนิลีนบลูในตัวอย่างแช่แข็ง

เนื่องจากชิ้นเนื้อแช่แข็งมีรูพรุนสูงและดูดซับสีย้อมได้เร็ว จึงจำเป็นต้องมีขั้นตอนการเจือจางพิเศษในขั้นตอนต่อๆ ไปของกระบวนการ ในขั้นตอนการย้อมด้วยแอนิลีนบลู คุณควรเจือจางสารละลายแอนิลีนบลูสามถึงห้าเท่าโดยใช้สารละลายกรดอ่อน เพื่อป้องกันไม่ให้สีเข้มเกินไปจนบดบังโครงสร้างของเซลล์ การข้ามขั้นตอนการเจือจางนี้มักส่งผลให้เกิดคราบสีน้ำเงินเข้มที่บดบังโครงสร้างของเซลล์อย่างสิ้นเชิง

ป้องกันการหลุดลอกของเนื้อเยื่อและรักษาความปลอดภัยของส่วนผ่าตัด

ชิ้นเนื้อแช่แข็งขาดโครงสร้างที่ช่วยพยุงเนื้อเยื่อเหมือนกับพาราฟิน ทำให้ชิ้นเนื้อมีความเปราะบางมากเมื่อทำการถ่ายโอนในของเหลว เมื่อทำการล้างและเคลื่อนย้ายสไลด์ระหว่างจุดย้อมสี ควรทำอย่างเบามือและช้าๆ เพื่อป้องกันไม่ให้เนื้อเยื่อหลุดออกจากกระจกหรือพับงอ นอกจากนี้ โปรดจำไว้ว่าชิ้นเนื้อแช่แข็งมักจะหนากว่าชิ้นเนื้อพาราฟินหลายเท่า ดังนั้นสีสุดท้ายอาจดูไม่คมชัดเท่าเมื่อมองผ่านกล้องจุลทรรศน์ ซึ่งเป็นผลมาจากความหนาตามปกติ

แก้ไขปัญหาพื้นหลังขุ่นมัวและสีจางในขั้นตอนการทำงาน

การกำจัดคราบพาราฟินด้วยการอบ

พื้นหลังที่สกปรกหรือมัวหมองมักหมายความว่าขี้ผึ้งพาราฟินละลายไม่หมดก่อนที่คุณจะเริ่มย้อมสี ขี้ผึ้งที่เหลือจะทิ้งฟิล์มบางๆ ไว้บนกระจกซึ่งจะดักจับสีย้อมแบบสุ่ม คุณสามารถแก้ไขได้โดยการอบสไลด์ในเตาอบนานขึ้นเพื่อให้แน่ใจว่าละลายหมด หรือโดยการเปลี่ยนไซลีนทั้งหมดด้วยไซลีนชุดใหม่เพื่อกำจัดขี้ผึ้งออกไป คุณสามารถอ่านเพิ่มเติมเกี่ยวกับเทคนิคการทำให้ใสล่าสุดและค้นหาข้อมูลเชิงลึกในอุตสาหกรรมได้ในส่วนของเรา ข่าวสารอัปเดตด้านเทคโนโลยี ส่วน.

การกรองตะกอนผลึกออกจากน้ำยาสำหรับย้อมสี

สาเหตุทั่วไปอีกประการหนึ่งที่ทำให้พื้นหลังสไลด์เบลอหรือสกปรกคือการสะสมของตะกอนในน้ำยาสำหรับย้อมสีที่เก่าแล้ว หากคุณสงสัยว่าอนุภาคทำให้ภาพไม่ชัด ให้หยดของเหลว 50 ไมโครลิตรลงบนสไลด์ที่สะอาด แล้วตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ หากคุณเห็นเม็ดเล็กๆ หรือผลึกขนาดเล็กจำนวนมาก ให้กรองสารละลายผ่านกระดาษกรองมาตรฐานหรือตัวกรองแบบเข็มฉีดยาก่อนที่จะเทลงบนตัวอย่างเนื้อเยื่อของคุณ

วิธีการตากแห้งโดยตรงโดยไม่ต้องใช้แอลกอฮอล์

เมื่อสไลด์เริ่มซีดจางหรือสีจางลงเพียงไม่กี่วันหลังจากติดลงบนแผ่นสไลด์ ปัญหาเกือบทั้งหมดมักเกิดจากความชื้นในน้ำยาที่ใช้ในการทำให้แห้ง หากถังเอทานอลหรือไซลีนของคุณถูกใช้งานบ่อยเกินไป น้ำยาเหล่านั้นจะดูดซับน้ำจากสภาพแวดล้อม ซึ่งจะค่อยๆ ละลายสีย้อมสีแดงและสีน้ำเงินออกจากเนื้อเยื่อ เพื่อแก้ไขปัญหานี้ ให้เปลี่ยนน้ำยาที่ใช้ในการทำให้ใสและทำให้แห้งด้วยน้ำยาใหม่ หรืออีกทางเลือกหนึ่ง คุณสามารถข้ามขั้นตอนการทำให้แห้งด้วยแอลกอฮอล์ไปเลยหลังจากล้างด้วยกรดอ่อนครั้งสุดท้าย สะบัดน้ำส่วนเกินออก ปล่อยให้สไลด์แห้งสนิทบนโต๊ะ และติดลงบนแผ่นสไลด์โดยตรงด้วยเรซินที่เป็นกลาง

ข้อสรุป

การย้อมสี Masson trichrome ให้ได้ผลดีนั้นขึ้นอยู่กับการจัดการความสมดุลที่ละเอียดอ่อนระหว่างสีย้อมสีแดงและสีน้ำเงิน ในขณะเดียวกันก็ต้องควบคุมความบริสุทธิ์ของสารละลายและคุณภาพการทำให้แห้งด้วย การปรับเวลาการแยกสีด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกและการรักษาสารละลายแอลกอฮอล์ที่ใช้ในการทำให้แห้งให้ปราศจากน้ำ จะช่วยให้คุณหลีกเลี่ยงพื้นหลังที่ขุ่นมัวและสีที่จางได้อย่างสม่ำเสมอ การกำหนดมาตรฐานวิธีการแช่จะทำให้ขั้นตอนการทำงานทางพยาธิวิทยาในแต่ละวันของคุณมีความแม่นยำสูง หากคุณต้องการดูใบรับรองคุณภาพและประวัติบริษัทของเราทั้งหมด คุณสามารถอ่านรายละเอียดเพิ่มเติมได้ที่นี่ หน้าเรื่องราวของบริษัทสำหรับคำแนะนำเฉพาะเกี่ยวกับการตั้งค่าโปรโตคอลเหล่านี้หรือการเลือกชุดตรวจสอบขนาดใหญ่ คุณสามารถศึกษาเอกสารฉบับเต็มของเราได้ โซลูชันการทดสอบวินิจฉัย เพื่อปรับปรุงขั้นตอนการทำงานปกติในห้องปฏิบัติการของคุณให้ดียิ่งขึ้น

เอฟเอคิว

คำถามที่ 1: วัตถุประสงค์หลักของการใช้การย้อมสี Masson trichrome ในห้องปฏิบัติการคืออะไร?

A1: วิธีนี้ใช้ในการแยกแยะส่วนประกอบของเนื้อเยื่อเฉพาะภายใต้กล้องจุลทรรศน์ โดยจะทำให้เส้นใยคอลลาเจนมีสีน้ำเงินหรือเขียว ย้อมเส้นใยกล้ามเนื้อ ไซโตพลาซึม และเซลล์เม็ดเลือดแดงเป็นสีแดง และเปลี่ยนนิวเคลียสของเซลล์เป็นสีน้ำตาลเข้มหรือดำ ความแตกต่างที่ชัดเจนนี้ทำให้เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าสำหรับการวิเคราะห์พังผืดของเนื้อเยื่อ การพัฒนาของเนื้องอก และการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของกล้ามเนื้อ

คำถามที่ 2: ส่วนประกอบหลักแต่ละชิ้นในชุดอุปกรณ์ Masson มาตรฐาน มีบทบาทอย่างไรบ้าง?

A2: ส่วนประกอบแต่ละชนิดมีหน้าที่เฉพาะในการสร้างความแตกต่างของสีขั้นสุดท้าย สารละลาย Bouin ช่วยตรึงโครงสร้างของเนื้อเยื่อและทำหน้าที่เป็นสารช่วยยึดสีเพื่อเพิ่มการแทรกซึมของสีย้อม ฮีมาทอกซิลินเหล็กของ Weigert จับกับดีเอ็นเอในนิวเคลียสอย่างแน่นหนาและทนต่อขั้นตอนการล้าง กรดฟุคซินจะกำหนดเป้าหมายโครงสร้างที่หนาแน่น เช่น เส้นใยกล้ามเนื้อเพื่อให้มีสีแดง ในขณะที่กรดฟอสโฟโมลิบดิกจะแยกสีแดงออกจากโครงสร้างที่หลวมกว่า เตรียมคอลลาเจนสำหรับการย้อมด้วยอะนิลีนบลู ซึ่งจะย้อมเส้นใยคอลลาเจนเหล่านั้นให้เป็นสีน้ำเงิน สุดท้าย สารละลายกรดอ่อนๆ ทำหน้าที่เป็นสารตรึงสีเพื่อล็อคทั้งสีแดงและสีน้ำเงิน

Q3: เหตุใดชุด Masson ที่ผมดัดแปลงจึงทำงานแตกต่างจากชุดแบบดั้งเดิม?

A3: เวอร์ชันที่ปรับปรุงแล้วถูกสร้างขึ้นเพื่อลดขั้นตอนการทำงานในห้องปฏิบัติการและปกป้องช่างเทคนิค การรวมเอาสีเซเลสทีนบลูเข้ามาหมายความว่าคุณไม่ต้องเสียเวลาผสมเหล็กเฮมาทอกซิลินก่อนเริ่มขั้นตอนการทำงาน นอกจากนี้ การเปลี่ยนสารช่วยย้อมแบบเก่ามาใช้สารช่วยย้อมที่เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมจะให้สีสุดท้ายที่สดใสกว่าและลดความเสี่ยงในการย้อมตัวอย่างมากเกินไป

คำถามที่ 4: ฉันจะแก้ไขสไลด์ที่แสดงภาพเป็นสีม่วงแดงทั้งหมดโดยมีบริเวณสีฟ้าอ่อนได้อย่างไร?

A4: ปัญหานี้เกิดขึ้นเมื่อขั้นตอนการย้อมด้วยอนิลีนบลูสั้นเกินไป หรือหากกรดฟอสโฟโมลิบดิกไม่ได้แยกเนื้อเยื่อเป็นเวลานานพอ ทำให้มีสีย้อมสีแดงตกค้างมากเกินไป ลองเพิ่มระยะเวลาขั้นตอนการย้อมด้วยอนิลีนบลูทีละสามสิบวินาที หรือขยายขั้นตอนการแยกเนื้อเยื่อด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกออกไปเป็นสองหรือสามนาที เพื่อให้แน่ใจว่าสีแดงจางหายไปจากคอลลาเจนก่อนที่จะย้อมด้วยสีน้ำเงิน

Q5: ฉันควรทำอย่างไรหากเส้นใยกล้ามเนื้อของฉันดูซีดจางและภาพสไลด์ส่วนใหญ่เป็นสีน้ำเงิน?

A5: การเปลี่ยนสีนี้หมายความว่าขั้นตอนการย้อมด้วยอนิลีนบลูใช้เวลานานเกินไปและบดบังโครงสร้างสีแดง หรือขั้นตอนการย้อมด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกได้ล้างสีแดงออกมากเกินไป ลดเวลาการบ่มด้วยอนิลีนบลูและลองเพิ่มเวลาการย้อมด้วยกรดฟูชซิน นอกจากนี้ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าขั้นตอนการแยกสีด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกใช้เวลาสั้นๆ ประมาณสามสิบวินาทีถึงหนึ่งนาที เพื่อให้เส้นใยกล้ามเนื้อยังคงรักษาสีแดงไว้ได้

Q6: วิธีที่ดีที่สุดในการจัดการกับชิ้นส่วนต่างๆ คืออะไร หากฉันไม่สามารถติดตั้งชิ้นส่วนเหล่านั้นได้ทันที?

A6: คุณควรเก็บชิ้นเนื้อที่เปียกไว้ในภาชนะที่บรรจุสารละลายกรดอ่อนๆ เป็นเวลาไม่เกินสองสามชั่วโมง หากคุณสังเกตเห็นว่าสีเริ่มหลุดลอกออกจากเนื้อเยื่อและของเหลวขุ่น ให้รีบนำสไลด์ออกมาทันที นำไปผ่านกระบวนการกำจัดน้ำด้วยเอทานอลแบบไล่ระดับความเข้มข้นอย่างรวดเร็ว แล้วจึงนำไปติดบนแผ่นสไลด์ สไลด์ที่ปิดผนึกด้วยเรซินที่เป็นกลางสามารถเก็บรักษาได้อย่างปลอดภัยอย่างน้อยหกเดือนภายใต้สภาวะปกติ

Q7: ฉันจะปรับเวลาการย้อมสีมาตรฐานอย่างไรเมื่อต้องจัดการกับชิ้นเนื้อแช่แข็ง?

A7: ชิ้นเนื้อแช่แข็งดูดซับสีย้อมได้เร็วกว่าชิ้นเนื้อพาราฟินทั่วไป คุณควรลดเวลาการบ่มน้ำยาลงครึ่งหนึ่งสำหรับตัวอย่างที่ย้อมสีเร็ว เมื่อถึงขั้นตอนการย้อมด้วยแอนิลีนบลู ให้เจือจางสารละลายเข้มข้นลงสามถึงห้าเท่าด้วยสารละลายกรดอ่อนเพื่อหลีกเลี่ยงการย้อมสีมากเกินไป และควรจับสไลด์อย่างเบามือเสมอเพื่อป้องกันไม่ให้ชิ้นเนื้อที่เปราะบางหลุดออกจากกระจก

Q8: ทำไมสไลด์ของฉันถึงสีซีดจางลงหลังจากติดลงแผ่นเพียงไม่กี่วัน?

A8: การซีดจางอย่างรวดเร็วมักเกิดจากการปนเปื้อนของน้ำในถังแอลกอฮอล์บริสุทธิ์หรือไซลีน ซึ่งจะค่อยๆ ละลายสีย้อมออกไป ควรใช้น้ำยาทำความสะอาดและน้ำยาขจัดน้ำที่สดใหม่เสมอ หากการซีดจางยังคงเกิดขึ้น ให้ข้ามขั้นตอนการขจัดน้ำด้วยแอลกอฮอล์ไปเลยหลังจากล้างด้วยกรดอ่อนครั้งสุดท้าย ปล่อยให้สไลด์แห้งสนิทในอากาศบนโต๊ะทำงาน แล้วจึงติดลงบนสไลด์โดยตรงด้วยเรซินที่เป็นกลาง

Q9: ฉันจะจัดการกับสิ่งเจือปนหรือจุดขุ่นมัวบนพื้นหลังของชิ้นงานที่เสร็จแล้วได้อย่างไร?

A9: พื้นหลังที่ดูไม่ชัดเจนบ่งชี้ว่าการกำจัดแว็กซ์ไม่สมบูรณ์หรือเกิดการตกตะกอนของสารเคมี ลองเพิ่มเวลาในการอบหรือเปลี่ยนตัวทำละลายที่ใช้ในการทำให้ใสด้วยตัวทำละลายใหม่เพื่อกำจัดร่องรอยของแว็กซ์ทั้งหมด หากสารละลายย้อมสีมีอนุภาคขนาดเล็ก ให้กรองปริมาณเล็กน้อยผ่านกระดาษกรองคุณภาพสูงหรือตัวกรองแบบใช้เข็มฉีดยาโดยเฉพาะก่อนดำเนินการตามขั้นตอน เพื่อป้องกันไม่ให้เศษสิ่งสกปรกจากพื้นหลังเกาะติดกับชิ้นส่วน