วิธีการตรวจจับ กำจัด และป้องกันไมโคพลาสมาในเซลล์เพาะเลี้ยง

ไมโคพลาสมาเป็นหนึ่งในปัญหาที่เกิดขึ้นในการเพาะเลี้ยงเซลล์ ซึ่งอาจแฝงตัวอยู่เบื้องหลังเป็นเวลานาน อาหารเลี้ยงเซลล์อาจยังดูใส เซลล์อาจยังคงเกาะติดกัน และในตอนแรกดูเหมือนจะไม่มีอะไรผิดปกติร้ายแรง

จากนั้นผลลัพธ์ที่แปลกประหลาดก็เริ่มปรากฏขึ้น

เซลล์เจริญเติบโตช้าลงกว่าเดิม ประสิทธิภาพการถ่ายทอดยีนลดลงโดยไม่มีสาเหตุชัดเจน สารละลายเปลี่ยนเป็นสีเหลืองเร็วกว่าปกติ เซลล์บางส่วนรวมตัวกันเป็นกลุ่มไม่สม่ำเสมอ ในขณะที่บางส่วนแยกตัวออก การทดลองสองครั้งที่ดำเนินการด้วยโปรโตคอลเดียวกันให้ผลลัพธ์ที่ไม่เหมือนกันอีกต่อไป

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาอาจส่งผลกระทบต่อการเพาะเลี้ยงเชื้อแล้วในขณะนั้น

สิ่งมีชีวิตเหล่านี้มีขนาดเพียงประมาณ 50 ถึง 300 นาโนเมตร ทำให้สามารถลอดผ่านตัวกรองบางชนิดที่ใช้ดักจับแบคทีเรียทั่วไปได้ นอกจากนี้ ไมโคพลาสมายังไม่มีผนังเซลล์ ดังนั้นการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะกลุ่มเพนิซิลลิน-สเตรปโตไมซินตามปกติจึงไม่ให้การป้องกันที่เชื่อถือได้

แผนควบคุมการปนเปื้อนที่ได้ผลต้องมีสามส่วน ห้องปฏิบัติการต้องตรวจจับการปนเปื้อนได้ตั้งแต่เนิ่นๆ จัดการกับตัวอย่างที่ติดเชื้อได้อย่างรวดเร็ว และลดโอกาสที่ปัญหาเดิมจะกลับมาเกิดขึ้นอีก สำหรับห้องปฏิบัติการที่ใช้การตรวจคัดกรองด้วยฟลูออเรสเซนซ์ ชุดอุปกรณ์ครบชุดจะช่วยลดความยุ่งยากในการย้อมสี การตรึง การติดตั้ง และการเตรียมตัวอย่างสำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ นักวิจัยที่กำลังจัดตั้งกระบวนการจัดการการปนเปื้อนในวงกว้างสามารถตรวจสอบชุดอุปกรณ์ที่มีอยู่ได้เช่นกัน สารละลายสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ เมื่อวางแผนขั้นตอนประจำวัน

ทำไมจึงตรวจไม่พบเชื้อไมโคพลาสมาได้ง่าย?

วัฒนธรรมอาจยังดูปกติอยู่

การปนเปื้อนอย่างรุนแรงนั้นสังเกตได้ง่ายกว่า เซลล์อาจมีลักษณะเป็นเม็ดเล็กๆ เจริญเติบโตเป็นหย่อมๆ หลุดออกจากขวดเพาะเลี้ยง หรือหยุดการแบ่งตัวตามปกติ

การปนเปื้อนในระดับต่ำนั้นสังเกตได้ยากกว่ามาก เซลล์อาจยังคงเจริญเติบโตต่อไปได้ในขณะที่เกิดการเปลี่ยนแปลงทางเมตาบอลิซึมและการแสดงออกของยีน ไมโคพลาสมาใช้สารอาหารจากอาหารเลี้ยงเชื้อและสามารถรบกวนกระบวนการเมตาบอลิซึมของกรดอะมิโน การสังเคราะห์นิวคลีโอไทด์ การจำลองดีเอ็นเอ การผลิตอาร์เอ็นเอ และการแสดงออกของโปรตีนได้

สิ่งนี้อาจสร้างความหงุดหงิดอย่างมากในห้องปฏิบัติการ เมื่อผู้ปฏิบัติงานต้องปรับพารามิเตอร์สำหรับการถ่ายทอดพันธุกรรม เปลี่ยนซีรั่ม หรือทำการทดสอบซ้ำอย่างต่อเนื่อง โดยไม่ตระหนักว่าปัญหาที่แท้จริงอยู่ที่เซลล์ต้นแบบ

บางโครงการมีความอ่อนไหวมากกว่าโครงการอื่นๆ การส่งสัญญาณระดับเซลล์ การคัดกรองยา การแสดงออกของยีน การวิเคราะห์ไซโตไคน์ และงานด้านการถ่ายโอนยีน ล้วนอาจได้รับผลกระทบ นักวิจัยที่ทำงานในด้านเหล่านี้อาจต้องตรวจสอบข้อมูลที่เกี่ยวข้องเพิ่มเติมด้วย เส้นทางชีววิทยาของเซลล์ เมื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงที่ไม่คาดคิดในผลการทดลอง

การให้ยาปฏิชีวนะเป็นประจำอาจปกปิดปัญหาได้

ห้องปฏิบัติการหลายแห่งมักเติมเพนิซิลลินและสเตรปโตมัยซินลงในอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นประจำ ยาปฏิชีวนะเหล่านี้ช่วยควบคุมแบคทีเรียทั่วไปบางชนิด แต่ไม่ควรนำมาใช้เป็นระบบป้องกันไมโคพลาสมา

ไมโคพลาสมาไม่มีผนังเซลล์ ดังนั้นยาปฏิชีวนะที่ออกฤทธิ์ต่อการสร้างผนังเซลล์จึงมีผลกับมันน้อยมาก แม้ว่าการปนเปื้อนจะยังคงดำเนินต่อไป แต่ตัวอย่างเพาะเชื้ออาจยังคงใสอยู่

การใช้ยาปฏิชีวนะในระยะยาวอาจทำให้สังเกตสถานการณ์ได้ยากขึ้น เพราะอาจยับยั้งแบคทีเรียชนิดอื่นโดยไม่กำจัดไมโคพลาสมา ทำให้ตัวอย่างเพาะเชื้อดูสะอาด แต่ไม่เหมาะสมสำหรับการทดลองที่น่าเชื่อถือ

ไมโคพลาสมาจากการเพาะเลี้ยงเซลล์มาจากไหน?

ผู้คนเป็นแหล่งที่มาทั่วไป

การปนเปื้อนจำนวนมากเริ่มต้นจากการใช้งานตามปกติ ซึ่งเป็นเรื่องที่น่าประหลาดใจอย่างยิ่ง

เชื้อไมโคพลาสมาอาจปนเปื้อนอยู่ในน้ำลายและละอองฝอยจากการหายใจ การพูดคุยเหนือขวดทดลองที่เปิดอยู่ การสัมผัสโทรศัพท์ขณะสวมถุงมือ การเดินไปเดินมาระหว่างประตูและตู้ชีวความปลอดภัย หรือการสวมถุงมือเดิมนานเกินไป อาจนำเชื้อปนเปื้อนเข้ามาในพื้นที่ทำงานได้

การพ่นสเปรย์ใส่ถุงมือไม่ได้ทำให้การสัมผัสกับพื้นผิวทุกอย่างหายไป เมื่อถุงมือสัมผัสกับเก้าอี้ สมุดโน้ต ลูกบิดประตู หรือโทรศัพท์แล้ว การเปลี่ยนถุงมือใหม่มักจะปลอดภัยกว่า

ของเหลวที่หกเป็นอีกแหล่งที่มาที่พบได้บ่อย การกระเด็นเพียงเล็กน้อยภายในตู้ก็สามารถกระจายหยดไปยังหลอดหยด ขวด ชั้นวาง และภาชนะเพาะเลี้ยงที่อยู่ใกล้เคียงได้ ควรทำความสะอาดทันที ไม่ควรปล่อยทิ้งไว้จนถึงตอนท้ายของการใช้งาน

เซลล์ใหม่ที่ส่งมาอาจปนเปื้อนมาแล้ว

เซลล์ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการอื่นไม่ควรนำไปไว้ในห้องเพาะเลี้ยงหลักโดยตรง เซลล์สายพันธุ์นั้นอาจดูแข็งแรงดี แต่ก็ยังอาจมีไมโคพลาสม่าอยู่ได้

เนื้อเยื่อปฐมภูมิมีความเสี่ยงสูงกว่า เนื่องจากได้มาจากสัตว์หรือมนุษย์โดยตรง แม้แต่การสุ่มตัวอย่างอย่างระมัดระวังก็ไม่สามารถกำจัดแหล่งที่มาของการปนเปื้อนได้ทั้งหมด

ควรเพาะเลี้ยงเซลล์ใหม่แยกต่างหาก ทดสอบ และเก็บไว้ในที่กักกันจนกว่าจะได้รับการยืนยันผลลบ จากนั้นจึงสามารถแช่แข็งเซลล์ที่ได้มาเพื่อใช้ในภายหลัง

การใช้สารเคมีร่วมกันทำให้เกิดการปนเปื้อนอย่างรวดเร็ว

ขวดบรรจุอาหารเลี้ยงเซลล์ สารละลาย PBS เอนไซม์ทริปซิน หรือซีรั่มที่ปนเปื้อน อาจส่งผลกระทบต่อเซลล์มากกว่าหนึ่งสายพันธุ์ เช่นเดียวกับการใช้ปิเปต ท่อดูด และอ่างน้ำร้อนร่วมกัน

วิธีที่ปลอดภัยที่สุดคือการทำตามขั้นตอนง่ายๆ ดังนี้ จัดการกับเซลล์แต่ละสายพันธุ์ทีละสายพันธุ์ ใช้น้ำยาในปริมาณน้อย แยกน้ำยาสำหรับกักกันออกจากน้ำยาเพาะเลี้ยงเซลล์ทั่วไป และหลีกเลี่ยงการนำขวดเดียวกันไปใช้ในพื้นที่ทำงานที่แตกต่างกัน

วิธีการตรวจหาเชื้อไมโคพลาสมาแบบใดได้ผลดีที่สุด?

PCR และ qPCR เหมาะสมสำหรับการตรวจคัดกรองประจำวัน

การทดสอบด้วยวิธี PCR เป็นที่นิยมใช้กันอย่างแพร่หลาย เนื่องจากให้ผลลัพธ์ที่ชัดเจนภายในไม่กี่ชั่วโมง วิธีนี้มักตรวจจับลำดับดีเอ็นเอของไมโคพลาสมาที่คงที่ รวมถึงบริเวณที่เกี่ยวข้องกับยีน 16S rRNA

เหมาะสำหรับการคัดกรองเซลล์ใหม่ การตรวจสอบธนาคารเซลล์เป็นประจำ การแก้ไขปัญหา การประเมินซีรัมหรืออาหารเลี้ยงเซลล์ และการควบคุมคุณภาพก่อนการตีพิมพ์

Solarbio จำหน่ายผลิตภัณฑ์ตรวจจับไมโคพลาสม่าหลายชนิดสำหรับงานเพาะเลี้ยงเซลล์ ซึ่งรวมถึง... ชุดทดสอบไมโคพลาสมา CA1081 (วิธี PCR) และ ชุดทดสอบไมโคพลาสมาแบบรวดเร็ว CA1082 (สำหรับเพาะเลี้ยงเซลล์).

การย้อมสี Hoechst มีประโยชน์สำหรับการตรวจสอบอย่างรวดเร็ว

การย้อมสีเรืองแสง Hoechst มีราคาถูกและไม่จำเป็นต้องใช้อุปกรณ์ที่ซับซ้อนนอกเหนือจากกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงที่เหมาะสม สำหรับการคัดกรองโดยใช้การเรืองแสงนั้น ชุดตรวจหาเชื้อไมโคพลาสมา CA1080 ออกแบบมาเพื่อใช้ตรวจสอบไมโคพลาสมาในเซลล์เพาะเลี้ยงโดยใช้กล้องจุลทรรศน์

ชุดอุปกรณ์นี้ประกอบด้วย สารละลายใช้งาน Hoechst 33258, สารละลายตรึงสภาพ และสารยึดติดป้องกันการซีดจาง สำหรับการย้อมสี การตรึงสภาพ และการเตรียมสไลด์

ในตัวอย่างเซลล์ Vero ที่เป็นลบ การเรืองแสงของ Hoechst ส่วนใหญ่จะจำกัดอยู่เฉพาะในนิวเคลียส โดยไม่มีจุดเรืองแสงละเอียดจำนวนมากอยู่นอกนิวเคลียส

เมื่อมีการปนเปื้อน อาจปรากฏจุดเรืองแสงขนาดเล็กบริเวณผิวเซลล์หรือระหว่างเซลล์

การทดสอบนี้มีประโยชน์สำหรับการเรียนในห้องเรียน การตรวจสอบอย่างรวดเร็ว และห้องปฏิบัติการที่มีงบประมาณการทดสอบจำกัด

อย่างไรก็ตาม วิธีนี้มีข้อจำกัด เศษเซลล์ ร่างกายที่เกิดจากการตายของเซลล์ และแสงฟลูออเรสเซนต์พื้นหลัง อาจดูคล้ายกับไมโคพลาสมา หากผลการย้อมสีไม่แน่ชัด ควรตรวจสอบยืนยันด้วยวิธี PCR

การทดสอบทางวัฒนธรรมใช้เวลานานขึ้น

การทดสอบโดยใช้ตัวอย่างเพาะเลี้ยงยังคงมีความสำคัญในบางสถานการณ์ที่มีการควบคุมและขั้นตอนการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ โดยนำตัวอย่างไปวางบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมและตรวจสอบการเจริญเติบโตของไมโคพลาสมา

ปัญหาหลักคือเรื่องความเร็ว ผลลัพธ์อาจใช้เวลา 7 ถึง 21 วัน ซึ่งไม่เหมาะสมเมื่อห้องปฏิบัติการจำเป็นต้องตัดสินใจอย่างรวดเร็วว่าเซลล์ชุดนั้นสามารถนำไปใช้ได้หรือไม่

ไมโคพลาสมาบางชนิดเพาะเลี้ยงได้ยากกว่าชนิดอื่น ดังนั้นวิธีการจึงขึ้นอยู่กับอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมและผู้ปฏิบัติงานที่มีประสบการณ์

การทดสอบการเรืองแสงให้ผลลัพธ์ที่รวดเร็ว

การทดสอบการเรืองแสงอย่างรวดเร็วสามารถตรวจจับกิจกรรมของเอนไซม์หรือสัญญาณเมตาบอลิซึมที่เกี่ยวข้องกับไมโคพลาสมาที่ยังมีชีวิตอยู่ได้ วิธีนี้มีประโยชน์เมื่อต้องการตรวจสอบตัวอย่างจำนวนมากในเวลาอันสั้น

ห้องปฏิบัติการจำเป็นต้องมีอุปกรณ์ที่เหมาะสม และควรตรวจสอบการรบกวนจากพื้นหลังอย่างระมัดระวัง สำหรับงานที่มีความเสี่ยงสูง อาจยังคงต้องใช้ PCR หรือการยืนยันด้วยการเพาะเชื้อเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่รวดเร็ว

ทีมที่ไม่แน่ใจว่าวิธีการใดเหมาะสมกับประเภทเซลล์หรือตารางการทดสอบของตน สามารถใช้ผลิตภัณฑ์ของ Solarbio ได้ บริการทางเทคนิค แหล่งข้อมูลสำหรับการสนับสนุนผลิตภัณฑ์และกระบวนการทำงาน

ควรทำการรักษาเซลล์ที่ปนเปื้อนหรือไม่?

บางวัฒนธรรมนั้นควรถูกทิ้งไปเสียดีกว่า

การรักษาไม่ใช่ทางเลือกที่ถูกต้องเสมอไป

หากเซลล์สายพันธุ์นั้นหาทดแทนได้ง่าย ปนเปื้อนอย่างรุนแรง หรือถูกเก็บรักษาไว้ในรูปของสต็อกแช่แข็งที่สะอาดแล้ว การกำจัดทิ้งมักจะปลอดภัยกว่า การเก็บรักษาเซลล์ที่ปนเปื้อนอย่างรุนแรงไว้ในห้องปฏิบัติการจะสร้างความเสี่ยงให้กับเซลล์สายพันธุ์อื่นๆ ที่อยู่ใกล้เคียง

การกู้คืนเซลล์จะเหมาะสมกว่าเมื่อเซลล์เหล่านั้นหายาก ผ่านการดัดแปลงพันธุกรรม คัดเลือกมาเป็นเวลานาน มาจากเนื้อเยื่อต้นกำเนิดที่มีจำกัด หรือหาได้ยากอีกครั้ง

ต้องแยกเซลล์ที่ติดเชื้อออกก่อนเริ่มการรักษา ตู้เพาะเลี้ยง ตู้เก็บของ ระบบดูดของเหลว หลอดหยด อ่างน้ำ และพื้นผิวใกล้เคียงก็ควรได้รับการทำความสะอาดด้วย การรักษาเฉพาะเซลล์อย่างเดียวจะไม่ช่วยอะไรมากนักหากบริเวณที่ทำงานยังคงปนเปื้อนอยู่

การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะแบบทำเองนั้นควบคุมได้ยาก

ยาปฏิชีวนะกลุ่มมาโครไลด์ เตตราไซคลิน ควิโนโลน และสารประกอบที่เกี่ยวข้อง อาจใช้ได้ผลกับเชื้อไมโคพลาสมาบางชนิด ส่วนที่ยากคือการหาความเข้มข้นที่สามารถกำจัดเชื้อได้โดยไม่ทำลายเซลล์

ปริมาณยาที่เซลล์สายพันธุ์หนึ่งทนได้ อาจทำให้เซลล์สายพันธุ์อื่นหยุดการเจริญเติบโตได้ เซลล์ปฐมภูมิที่มีความไวสูงนั้นรับมือได้ยากเป็นพิเศษ

การใช้ยาในปริมาณต่ำอาจช่วยยับยั้งการปนเปื้อนได้เท่านั้น ผลการเพาะเชื้ออาจออกมาเป็นลบในระหว่างการรักษา แต่กลับมาเป็นบวกอีกครั้งในภายหลัง ด้วยเหตุนี้ การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะที่ทำเองจึงควรเริ่มต้นด้วยการทดสอบความทนทานในปริมาณน้อยก่อน แทนที่จะใช้เซลล์ทั้งหมดที่มีอยู่

น้ำยาขจัดคราบเชิงพาณิชย์ใช้งานง่ายกว่า

น้ำยาขจัดไมโคพลาสมาเชิงพาณิชย์ช่วยให้ห้องปฏิบัติการไม่ต้องเตรียมยาปฏิชีวนะหลายชนิดและทดสอบความเข้มข้นหลายระดับตั้งแต่เริ่มต้น

โซลาร์ไบโอ CA1090 สารกำจัดไมโคพลาสมา และ CA1093 น้ำยาสำหรับกำจัดไมโคพลาสมา มีจุดประสงค์เพื่อใช้ในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีการปนเปื้อน การบำบัดมักดำเนินต่อไปหลายรอบ ขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์และระดับการปนเปื้อน

ไม่ควรทำการทดสอบเซลล์เฉพาะในขณะที่ยังมีสารกำจัดสารเคมีอยู่ หลังจากทำการรักษาแล้ว เซลล์ต้องการระยะเวลาพักฟื้นในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากสารเคมี จากนั้นจึงทำการทดสอบซ้ำ ผลลัพธ์ที่เป็นลบครั้งที่สองหลังจากเพาะเลี้ยงเพิ่มเติมจะให้คำตอบที่น่าเชื่อถือมากกว่า

จะป้องกันการปนเปื้อนของไมโคพลาสมาได้อย่างไร?

ห้องกักกันก่อนใช้งานตามปกติ

สายเซลล์ขาเข้าทุกสายควรมีบันทึกข้อมูล บันทึกนั้นควรประกอบด้วยแหล่งที่มา วันที่มาถึง หมายเลขการผ่าน ผลการทดสอบ ผู้ดำเนินการ และตำแหน่งการจัดเก็บ

ควรแยกเพาะเลี้ยงเชื้อไว้ต่างหากจนกว่าการทดสอบจะเสร็จสมบูรณ์ หลังจากผลเป็นลบ ควรแช่แข็งเชื้อต้นแบบที่สะอาดไว้ จากนั้นจึงเริ่มงานในอนาคตจากเชื้อต้นแบบนี้แทนที่จะใช้เชื้อเก่าที่เก็บไว้นานหลายเดือน

ทำความสะอาดอุปกรณ์ที่ใช้ร่วมกันเป็นประจำ

ตู้ชีวความปลอดภัยต้องทำความสะอาดก่อนและหลังการใช้งาน ถาดใส่น้ำในตู้บ่มเพาะควรเทน้ำทิ้งและฆ่าเชื้อตามกำหนดเวลาอย่างสม่ำเสมอ นอกจากนี้ อ่างน้ำร้อน ตัวยึดสำหรับเครื่องปั่นเหวี่ยง แท่นวางกล้องจุลทรรศน์ ขวดดูด และปิเปต ก็ต้องการการดูแลเช่นกัน

สเปรย์กำจัดไมโคพลาสมา Solarbio CA1091 สามารถใช้เป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการทำความสะอาดสิ่งแวดล้อมได้ น้ำยาป้องกันไมโคพลาสมา CA1101 มีจำหน่ายสำหรับใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อป้องกัน ห้องปฏิบัติการสามารถตรวจสอบได้ การอัปเดตผลิตภัณฑ์ เมื่อตรวจสอบเอกสารเกี่ยวกับการควบคุมการปนเปื้อนของพวกเขา

ทดสอบเซลล์ในเวลาที่เหมาะสม

การทดสอบปีละครั้งไม่เพียงพอสำหรับห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีการใช้งานอย่างต่อเนื่อง

ควรทดสอบเซลล์ทันทีที่ได้รับ ก่อนนำเซลล์ต้นแบบไปแช่แข็ง หลังจากละลายเซลล์ต้นแบบที่สำคัญ ก่อนทำการทดลองระยะยาว ก่อนที่จะแบ่งปันเซลล์กับห้องปฏิบัติการอื่น และเมื่อใดก็ตามที่พบการเจริญเติบโตที่ผิดปกติ

ช่วงเวลาการทดสอบสามเดือนถือเป็นจุดเริ่มต้นที่เหมาะสมสำหรับห้องปฏิบัติการวิจัยหลายแห่ง ห้องปฏิบัติการที่มีปริมาณงานสูงหรือห้องปฏิบัติการที่รับเซลล์จากภายนอกเป็นประจำอาจจำเป็นต้องทดสอบบ่อยกว่านั้น

การบันทึกข้อมูลที่ดีมีความสำคัญไม่แพ้การทดสอบเอง เมื่อเซลล์ทุกสายพันธุ์มีประวัติที่ชัดเจน จะทำให้ติดตามได้ง่ายขึ้นว่าการปนเปื้อนเริ่มต้นจากที่ใด และเซลล์เพาะเลี้ยงใดบ้างที่อาจได้รับผลกระทบ

โซลาร์บิโอ บริษัทจัดจำหน่ายผลิตภัณฑ์สำหรับการวิจัยด้านชีววิทยาของเซลล์ ชีววิทยาระดับโมเลกุล ภูมิคุ้มกันวิทยา ชีวเคมี การย้อมสี มาตรฐานการวิเคราะห์ และโมเลกุลขนาดเล็ก ระบบการจัดการของบริษัทได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO 9001, ISO 13485, ISO 14001 และ ISO 45001

ข้อสรุป

การควบคุมไมโคพลาสมาไม่จำเป็นต้องใช้ระบบที่ซับซ้อน แต่จำเป็นต้องมีการดำเนินการอย่างสม่ำเสมอ

ทดสอบเซลล์ใหม่ก่อนนำเข้าห้องปฏิบัติการหลัก แยกเซลล์สายพันธุ์ต่างๆ และสารเคมีออกจากกัน ทำความสะอาดอุปกรณ์ที่ใช้ร่วมกันตามกำหนดเวลา แช่แข็งเซลล์ต้นแบบที่สะอาดในขณะที่เซลล์ยังอยู่ในสภาพดี

เมื่อตรวจพบการปนเปื้อน ให้แยกเซลล์ออกก่อน เปลี่ยนตัวอย่างเพาะเลี้ยงใหม่หากเป็นไปได้ หากเซลล์มีค่า ให้ใช้กระบวนการกำจัดที่ควบคุมได้ และยืนยันผลลัพธ์หลังจากกำจัดสารเคมีที่ใช้ในการรักษาออกแล้ว

ประเด็นสำคัญคืออย่ารอจนกว่าตัวกลางจะเปลี่ยนสีหรือเซลล์เริ่มร่วงหล่นจากขวดทดลอง เพราะถึงตอนนั้นข้อมูลการทดลองอาจได้รับผลกระทบไปแล้ว

หากต้องการความช่วยเหลือในการเลือกผลิตภัณฑ์ตรวจจับ กำจัด หรือป้องกันที่เหมาะสม ติดต่อทีมงาน Solarbio.

เอฟเอคิว

คำถามที่ 1: ยาปฏิชีวนะกลุ่มเพนิซิลลิน-สเตรปโตไมซินสามารถป้องกันการปนเปื้อนของเชื้อไมโคพลาสมาได้หรือไม่?

A1: ไม่ได้ ยาปฏิชีวนะกลุ่มเพนิซิลลิน-สเตรปโตไมซินไม่สามารถป้องกันได้อย่างมีประสิทธิภาพ เนื่องจากไมโคพลาสมาไม่มีโครงสร้างผนังเซลล์ตามปกติ ซึ่งเป็นเป้าหมายของยาปฏิชีวนะมาตรฐานหลายชนิด

คำถามที่ 2: ควรตรวจสอบไมโคพลาสมาในเซลล์เพาะเลี้ยงบ่อยแค่ไหน?

A2: ห้องปฏิบัติการหลายแห่งทำการทดสอบทุกสามเดือน ควรทำการทดสอบเมื่อเซลล์มาถึง ก่อนการแช่แข็งสต็อกหลัก ก่อนการทดลองสำคัญ และเมื่อพบการเจริญเติบโตที่ผิดปกติ

คำถามที่ 3: สามารถระบุการปนเปื้อนของไมโคพลาสมาได้โดยการดูจากตัวกลางเพาะเลี้ยงหรือไม่?

A3: ไม่มั่นใจนัก สารละลายอาจยังคงใสในช่วงเริ่มต้นของการปนเปื้อน การเหลืองอย่างรวดเร็ว การเจริญเติบโตของเซลล์ช้า การถ่ายทอดสารพันธุกรรมไม่ดี หรือรูปร่างผิดปกติ อาจเป็นสัญญาณเตือน แต่ก็ยังจำเป็นต้องทำการทดสอบอย่างถูกต้องอยู่ดี

คำถามที่ 4: การตรวจด้วยวิธี PCR ดีกว่าการย้อมสี Hoechst ในการตรวจหาไมโคพลาสมาหรือไม่?

A4: วิธีการทั้งสองสามารถใช้เสริมกันได้: การย้อมสี Hoechst เหมาะสำหรับการตรวจสอบตามปกติและการคัดกรองเบื้องต้น ในขณะที่ PCR เหมาะสมกว่าสำหรับการทดสอบยืนยันการปนเปื้อนที่สงสัย หรือสถานการณ์ที่ต้องการความไวสูงกว่า สำหรับตัวอย่างที่สำคัญหรือการทดสอบการปล่อยล็อตยาชีวเภสัชภัณฑ์ แนะนำให้ใช้วิธีการเพาะเลี้ยงเชื้อ (มาตรฐานทองคำ) ร่วมกับวิธีการอื่น หรือใช้วิธีการหลายวิธีเพื่อตรวจสอบความถูกต้อง เพื่อเพิ่มความน่าเชื่อถือของผลลัพธ์

คำถามที่ 5: เซลล์สายพันธุ์ที่ปนเปื้อนทุกสายพันธุ์ควรได้รับการกู้คืนหรือไม่?

A5: ไม่ค่ะ เซลล์ที่สามารถเปลี่ยนใหม่ได้หรือเซลล์ที่ปนเปื้อนอย่างหนักมักจะปลอดภัยกว่าหากทิ้งไป การกู้คืนเซลล์ส่วนใหญ่จะพิจารณาเฉพาะกับเซลล์สายพันธุ์หายาก เซลล์ปฐมภูมิ เซลล์ที่คัดเลือกแล้ว หรือเซลล์ที่ได้รับการดัดแปลงทางพันธุกรรมเท่านั้น

Q6: ควรทำการทดสอบเซลล์ซ้ำอีกครั้งเมื่อใดหลังจากได้รับการรักษา?

A6: หลังจากการรักษาเพื่อกำจัดไมโคพลาสมาแล้ว ให้ทำการทดสอบ PCR ครั้งแรกหลังจากผ่านไป 2-3 รอบการเพาะเลี้ยง (7-10 วัน) และทำการทดสอบครั้งที่สองในอีก 7 วันต่อมา หากผลการทดสอบเป็นลบติดต่อกันสองครั้ง แสดงว่าได้ผลเบื้องต้นแล้ว ให้ติดตามผลอย่างต่อเนื่องจนกว่าจะได้ผลเป็นลบในวันที่ 28 เพื่อยืนยันว่ากำจัดเชื้อได้หมดแล้ว

Q7: ผลิตภัณฑ์ใดบ้างของ Solarbio ที่ครอบคลุมการตรวจจับและควบคุมไมโคพลาสมา?

A7: Solarbio ให้บริการผลิตภัณฑ์ CA1080, CA1081 และ CA1082 สำหรับการตรวจจับ, CA1090 และ CA1093 สำหรับการกำจัด, CA1091 สำหรับการทำความสะอาดสิ่งแวดล้อม และ CA1101 สำหรับการป้องกัน