การทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ทริปซิน: วิธีการวัดด้วยสเปกโทรโฟโตเมตรีแบบง่าย

การกล่าวถึงฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ทริปซินนั้นทำได้ง่าย แต่การวัดผลให้ได้ผลดีนั้นไม่ใช่เรื่องง่ายเสมอไป สารสกัดจากถั่วเหลืองที่ดูใสอาจยังมีสารยับยั้งที่ออกฤทธิ์อยู่เป็นจำนวนมาก ตัวอย่างพืชอาจแสดงโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันในระดับสูง แต่สิ่งนี้ไม่ได้หมายความว่ากิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินจะถูกยับยั้งจริง ๆ

ด้วยเหตุนี้ การทดสอบกิจกรรมจึงมีประโยชน์ การทดสอบนี้วัดผลกระทบของโปรตีนยับยั้งต่อเอนไซม์ทริปซิน แทนที่จะวัดปริมาณของโปรตีนยับยั้ง จะวัดผลกระทบต่อเอนไซม์ทริปซินแทน โดยจะอ่านค่าปฏิกิริยาสีโดยใช้เครื่องสเปกโทรโฟโตมิเตอร์หรือเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตร

วิธีการนี้ใช้ได้ผลดีกับตัวอย่างอาหาร เนื้อเยื่อพืช วัตถุดิบอาหารสัตว์ โปรตีนบริสุทธิ์ และตัวอย่างวิจัยอื่นๆ ห้องปฏิบัติการที่ต้องการทำการทดสอบนี้ร่วมกับการวัดเอนไซม์หรือโปรตีนอื่นๆ สามารถตรวจสอบผลิตภัณฑ์ของ Solarbio ได้เช่นกัน โซลูชันการวิจัยด้านวิทยาศาสตร์ชีวภาพ สำหรับผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องและการสนับสนุนขั้นตอนการทำงาน

สารยับยั้งทริปซินคืออะไร?

สารยับยั้งทริปซินเป็นโปรตีน/เปปไทด์ที่สามารถจับกับทริปซินเพื่อลดกิจกรรมของเอนไซม์ สารยับยั้งทริปซินพบได้ในพืช สัตว์ และจุลินทรีย์

ทริปซินเป็นเอนไซม์โปรตีเอสชนิดเซริน ซึ่งสามารถย่อยโปรตีนขนาดใหญ่ในอาหารให้เป็นเปปไทด์ขนาดเล็กได้ ในสัตว์ ทริปซินถูกผลิตโดยตับอ่อนในรูปของทริปซิโนเจน ซึ่งเป็นสารตั้งต้นที่ไม่ทำงาน ทริปซิโนเจนจะถูกกระตุ้นให้กลายเป็นทริปซินในลำไส้เล็กของสัตว์

ขั้นตอนการกระตุ้นนั้นมีความสำคัญ เอนไซม์ทริปซินในระบบย่อยอาหารของเรามีประโยชน์มาก แต่หากเอนไซม์นี้ทำงานในเนื้อเยื่อส่วนอื่น ๆ ของร่างกาย มันจะก่อให้เกิดความเสียหายต่อเนื้อเยื่อเหล่านั้น ซึ่งโดยธรรมชาติแล้วจะถูกยับยั้งโดยโปรตีนอื่น ๆ

ในพืช สารยับยั้งทริปซินเป็นโปรตีนป้องกันตัวที่สามารถรบกวนเอนไซม์ย่อยอาหารของแมลงและสิ่งมีชีวิตอื่นๆ ที่กินพืชเป็นอาหารได้ ดังนั้นโมเลกุลประเภทเดียวกันจึงสามารถศึกษาได้ในกรอบของสรีรวิทยาการย่อยอาหาร การแปรรูปอาหาร การป้องกันพืช และการควบคุมโปรตีน

สารยับยั้งทริปซินชนิดคูนิทซ์

สารยับยั้งทริปซินชนิดคูนิทซ์เป็นโปรตีนขนาดใหญ่ มีน้ำหนักโมเลกุล 18-24 กิโลดาลตัน สารยับยั้งเหล่านี้มักมีตำแหน่งที่ทำปฏิกิริยาได้ 1 ตำแหน่ง และพันธะไดซัลไฟด์ 2-3 ชุด

สารยับยั้งโปรตีเอสหลายชนิดสร้างสารเชิงซ้อนแบบ 1:1 กับโมเลกุลของทริปซินหนึ่งโมเลกุล สารเชิงซ้อนระหว่างสารยับยั้งและเอนไซม์มีความเสถียรมาก เอนไซม์ในสารเชิงซ้อนดังกล่าวจะสูญเสียกิจกรรมเร่งปฏิกิริยาไปเป็นจำนวนมาก

สารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินจากตับอ่อนของวัว หรือที่เรียกว่า BPTI หรืออะโปรตินิน เป็นตัวอย่างที่พบได้ทั่วไป นอกจากนี้ สารยับยั้งโปรตีเอสหลายชนิดที่แยกได้จากมันฝรั่งก็อยู่ในกลุ่มคูนิทซ์เช่นกัน

ในการวิจัยด้านอาหารและอาหารสัตว์ โปรตีนเหล่านี้จะถูกศึกษาหลังจากผ่านการให้ความร้อน แม้ว่าปริมาณโปรตีนยับยั้งจะยังคงอยู่หลังจากการแปรรูป แต่ฤทธิ์ของโปรตีนอาจลดลงอย่างมาก ดังนั้น การทดสอบฤทธิ์จึงเหมาะสมกว่าการหาปริมาณโปรตีนทั้งหมด

สารยับยั้งทริปซินของโบว์แมน-เบิร์ก

สารยับยั้ง Bowman-Birk มีขนาดเล็กกว่า โดยมักมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 6 ถึง 10 กิโลดาลตัน โครงสร้างของมันมีขนาดกะทัดรัดและโดยทั่วไปประกอบด้วยพันธะไดซัลไฟด์เจ็ดคู่

คุณสมบัติที่มีประโยชน์อย่างหนึ่งคือ สารเหล่านี้สามารถมีตำแหน่งปฏิกิริยาแยกกันได้สองตำแหน่ง ตำแหน่งหนึ่งอาจยับยั้งเอนไซม์ทริปซิน ในขณะที่อีกตำแหน่งหนึ่งยับยั้งเอนไซม์ไคโมทริปซิน ซึ่งทำให้มีช่วงการยับยั้งที่กว้างกว่าสารยับยั้งที่มีตำแหน่งเดียวหลายชนิด

สารเหล่านี้พบได้ในถั่วเหลือง ฟักทอง ถั่วเขียว ถั่วแดง ดอกทานตะวัน บัควีท และวัสดุจากพืชอื่นๆ โครงสร้างที่เสถียรของสารเหล่านี้ดึงดูดความสนใจทั้งในด้านวิทยาศาสตร์อาหารและการวิจัยส่วนผสมเชิงฟังก์ชัน

เหตุใดห้องปฏิบัติการจึงวัดกิจกรรมของสารยับยั้งทริปซิน?

การทดสอบแบบเดียวกันสามารถให้คำตอบที่แตกต่างกันได้มาก ผู้ผลิตอาหารอาจต้องการทราบว่าความร้อนช่วยลดฤทธิ์ต้านสารอาหารหรือไม่ นักวิจัยพืชอาจต้องการเปรียบเทียบความต้านทานต่อแมลงระหว่างตัวอย่าง ห้องปฏิบัติการโปรตีนอาจตรวจสอบประสิทธิภาพของสารยับยั้งที่ผ่านการทำให้บริสุทธิ์แล้ว

วิธีการทดสอบยังคงคล้ายคลึงกัน แต่รูปแบบการอ่านผลลัพธ์จะแตกต่างกันไปตามแต่ละโครงการ

การแปรรูปอาหารและอาหารสัตว์

ถั่วเหลืองดิบและพืชตระกูลถั่วอื่นๆ อาจมีสารยับยั้งเอนไซม์ทริปซินในปริมาณที่สังเกตได้ เมื่อรับประทานอาหารเหล่านี้โดยไม่ผ่านการให้ความร้อนอย่างเพียงพอ การย่อยโปรตีนอาจมีประสิทธิภาพลดลง

ร่างกายอาจตอบสนองโดยการผลิตเอนไซม์ย่อยอาหารมากขึ้น ในการศึกษาเกี่ยวกับการบริโภคอาหารในระยะยาว พบว่าการบริโภคสารยับยั้งในปริมาณสูงมีความเชื่อมโยงกับการเปลี่ยนแปลงในการทำงานของตับอ่อนด้วย

การให้ความร้อนจะลดฤทธิ์ของสารยับยั้ง แต่ความร้อนที่มากเกินไปก็ไม่ได้ดีเสมอไป หากการรักษาอ่อนเกินไป สารยับยั้งที่ออกฤทธิ์จะยังคงมีอยู่มากเกินไป หากการรักษาเข้มข้นเกินไป โปรตีนที่มีประโยชน์อาจถูกทำลายและคุณภาพทางโภชนาการอาจลดลง

การทดสอบหาปริมาณสารยับยั้งทริปซินช่วยให้ผู้แปรรูปตรวจสอบความสมดุลนั้นได้ โดยให้ผลลัพธ์โดยตรงเกี่ยวกับสารยับยั้งที่ยังคงออกฤทธิ์อยู่หลังการแปรรูป

Solarbio นำเสนอผลิตภัณฑ์ที่หลากหลายยิ่งขึ้น ชุดทดสอบทางชีวเคมี สำหรับห้องปฏิบัติการที่ต้องการวัดกิจกรรมของเอนไซม์ สารเมตาบอไลต์ ตัวบ่งชี้ความเครียดจากออกซิเดชัน หรือคุณสมบัติของตัวอย่างที่เกี่ยวข้องในโครงการเดียวกัน

การศึกษาการป้องกันพืช

พืชสามารถเพิ่มการผลิตสารยับยั้งทริปซินได้หลังจากถูกแมลงกัดกินหรือถูกเชื้อโรคโจมตี สารยับยั้งนี้จะเข้าสู่ระบบย่อยอาหารของแมลงที่กัดกินและปิดกั้นการทำงานของเอนไซม์โปรตีเอสบางส่วน

วิธีนี้ไม่ได้ฆ่าแมลงโดยตรงเสมอไป ส่วนใหญ่แล้วจะทำให้การย่อยอาหารมีประสิทธิภาพลดลง การเจริญเติบโตอาจช้าลง การกินอาหารอาจเปลี่ยนแปลงไป และการพัฒนาอาจล่าช้า

นักวิจัยอาจเปรียบเทียบกิจกรรมการยับยั้งระหว่างพันธุ์พืช กลุ่มการทดลอง หรือสภาวะความเครียดต่างๆ ข้อมูลการแสดงออกของยีนสามารถแสดงให้เห็นว่ายีนยับยั้งถูกเปิดใช้งานหรือไม่ การทดสอบกิจกรรมแสดงให้เห็นว่าโปรตีนที่ผลิตขึ้นยังคงทำงานได้หรือไม่

สำหรับโครงการที่เชื่อมโยงกิจกรรมยับยั้งกับการส่งสัญญาณความเครียดหรือการเปลี่ยนแปลงทางเมตาบอลิซึม Solarbio คือตัวเลือกที่เหมาะสม แหล่งข้อมูลการวิจัยเส้นทาง สามารถช่วยในการคัดเลือกสารประกอบ แอนติบอดี และผลิตภัณฑ์ทดสอบที่เกี่ยวข้องได้

การควบคุมโปรตีเอสในแบบจำลองทางชีววิทยา

สารยับยั้งทริปซินยังมีบทบาทในการปกป้องระบบต่างๆ ในสัตว์ด้วย SPINK1 เป็นตัวอย่างหนึ่ง มันช่วยจำกัดการกระตุ้นทริปซินก่อนกำหนดภายในตับอ่อน

เมื่อกลไกการควบคุมนี้ล้มเหลว เนื้อเยื่อตับอ่อนอาจสัมผัสกับเอนไซม์ย่อยอาหารที่ออกฤทธิ์ นี่เป็นเหตุผลหนึ่งที่การควบคุมเอนไซม์ทริปซินมักถูกกล่าวถึงในการวิจัยเกี่ยวกับตับอ่อนอักเสบ

อะโปรตินินและสารยับยั้งโปรตีเอสอื่นๆ ได้รับการศึกษาในแบบจำลองการอักเสบ ภาวะขาดเลือด บวมน้ำ และอื่นๆ โครงการเหล่านี้มักต้องการการวัดผลมากกว่าหนึ่งวิธี สัญญาณเอนไซม์ที่ลดลงอาจแสดงถึงการยับยั้ง แต่ไม่ได้อธิบายการเปลี่ยนแปลงทางชีวภาพที่เกิดขึ้นทั้งหมด

วิธีการวัดด้วยสเปกโทรโฟโตเมตรีทำงานอย่างไร?

หลักการทางเคมีพื้นฐานไม่ซับซ้อน เอนไซม์ทริปซินทำปฏิกิริยากับสารตั้งต้นที่ให้สี ปฏิกิริยานี้จะปล่อยผลิตภัณฑ์สีเหลืองออกมา เมื่อมีสารยับยั้งไปปิดกั้นการทำงานของทริปซิน จะทำให้เกิดผลิตภัณฑ์สีเหลืองน้อยลง

โซลาร์ไบโอ ชุดทดสอบกิจกรรมยับยั้งเอนไซม์ทริปซิน BC6860/BC6865 ตั้งอยู่บนหลักการนี้

BAPNA ในฐานะสารตั้งต้นสร้างสี

BAPNA ถูกใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับเอนไซม์ทริปซิน เมื่อทริปซินย่อยสลาย BAPNA จะได้ p-nitroaniline ออกมา

พี-ไนโตรอะนิลีน (P-nitroaniline) ซึ่งมักเขียนย่อว่า p-NA มีสีเหลืองและสามารถวัดได้ที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตร เอนไซม์ทริปซินที่ทำงานมากขึ้นจะผลิต p-NA มากขึ้น ดังนั้นค่าการดูดกลืนแสงจึงสูงขึ้น

เมื่อตัวอย่างมีสารยับยั้งทริปซิน เอนไซม์บางส่วนจะถูกปิดกั้น ทำให้ไฮโดรไลซ์ BAPNA น้อยลง ปริมาณ p-NA ลดลง และค่าการดูดกลืนแสงก็ต่ำลง

ดังนั้น การทดสอบนี้จึงวัดกิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินที่เหลืออยู่หลังจากการสัมผัสกับตัวอย่าง โดยไม่ได้ย้อมสีหรือวัดสารยับยั้งโดยตรง

ค่าการอ่านที่ต่ำลงหมายความว่าอย่างไร?

ค่าการดูดกลืนแสงที่ต่ำกว่ามักหมายถึงการยับยั้งที่รุนแรงกว่า โดยมีเงื่อนไขว่าปฏิกิริยาของตัวอย่างว่างเปล่าและปฏิกิริยาควบคุมนั้นถูกต้อง

สารยับยั้งที่อ่อนแอจะทำให้เอนไซม์ทริปซินส่วนใหญ่ยังคงทำงานอยู่ ปฏิกิริยาจะยังคงเป็นสีเหลืองและให้ค่าที่อ่านได้สูงกว่า ส่วนสารยับยั้งที่แรงจะปิดกั้นเอนไซม์ได้มากกว่า ดังนั้นจึงได้ผลิตภัณฑ์สีเหลืองน้อยลง

การคำนวณขั้นสุดท้ายจะเปรียบเทียบปฏิกิริยาของตัวอย่างกับตัวควบคุมที่กำหนดไว้ ผลลัพธ์อาจรายงานเป็นค่ากิจกรรมการยับยั้ง หน่วยการยับยั้ง หรือค่ากิจกรรมที่ปรับให้เป็นมาตรฐานตามน้ำหนักตัวอย่างหรือปริมาณโปรตีน

ตัวอย่างที่อยู่นอกช่วงการวัดที่แนะนำควรเจือจางและทดสอบอีกครั้ง การใช้ค่าการดูดกลืนแสงที่อยู่นอกช่วงเชิงเส้นอาจทำให้การคำนวณดูสวยงาม แต่ไม่น่าเชื่อถือ

อะไรคือสาเหตุที่ทำให้ผลลัพธ์ไม่คงที่?

ปัญหาส่วนใหญ่ไม่ได้เกิดจากแนวคิดเบื้องหลังการทดสอบ แต่เกิดจากการจัดการตัวอย่าง

การสกัดตัวอย่างที่ไม่สม่ำเสมอ

ตัวอย่างพืชและอาหารจำเป็นต้องบดให้ละเอียด ตัวอย่างที่หยาบหรือไม่สม่ำเสมออาจทำให้สารยับยั้งถูกปล่อยออกมาในปริมาณที่ไม่เท่ากันในแต่ละส่วน

น้ำหนักตัวอย่าง ปริมาตรการสกัด เวลาในการผสม อุณหภูมิในการสกัด และสภาวะการปั่นเหวี่ยง ควรคงที่ในทุกกลุ่ม การเปลี่ยนแปลงค่าใดค่าหนึ่งเหล่านี้ระหว่างการทดลองอาจส่งผลต่อผลลัพธ์ได้

สารสกัดที่มีสีเข้มหรือขุ่นอาจทำให้เกิดการดูดกลืนแสงพื้นหลังเพิ่มขึ้น การใช้ตัวอย่างเปล่าจึงเป็นประโยชน์อย่างยิ่ง หากไม่มีตัวอย่างเปล่า สีธรรมชาติของตัวอย่างอาจถูกเข้าใจผิดว่าเป็นผลิตภัณฑ์จากปฏิกิริยา

ความแตกต่างของเวลาในการเจาะบ่อ

ปฏิกิริยาของเอนไซม์ยังคงดำเนินต่อไปในขณะที่กำลังจับต้องจานหรือหลอดทดลอง หากตัวอย่างแรกได้รับสารตั้งต้นก่อนตัวอย่างสุดท้ายหลายนาที ความแตกต่างอาจปรากฏให้เห็นในค่าการดูดกลืนแสงสุดท้าย

สำหรับการใช้เพลทขนาดใหญ่ ปิเปตแบบหลายช่องมักช่วยให้ควบคุมเวลาได้ง่ายขึ้น สำหรับการทดลองในหลอดทดลอง อาจจะดีกว่าหากทำการทดลองเป็นกลุ่มเล็กๆ แทนที่จะเริ่มทดลองทุกตัวอย่างพร้อมกัน

อุณหภูมิก็มีความสำคัญเช่นกัน กิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินอาจเปลี่ยนแปลงได้เมื่อสารเคมีวางทิ้งไว้บนโต๊ะนานเกินไป หรือเมื่อหลอดทดลองไม่ได้ถูกเก็บไว้ภายใต้สภาวะเดียวกัน

ห้องปฏิบัติการที่ทำงานกับตัวอย่างประเภทที่ผิดปกติสามารถสอบถามข้อมูลจาก Solarbio ได้ ทีมบริการด้านเทคนิค เกี่ยวกับการสกัด การเจือจาง และการตั้งค่าการทดสอบ

การควบคุมที่หายไป

หลอดตัวอย่างเพียงอย่างเดียวไม่เพียงพอ การทดสอบจำเป็นต้องมีตัวควบคุมสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์ พื้นหลังของสารตั้งต้น สีของตัวอย่าง และการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงอื่นๆ ที่ไม่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์

เป็นเรื่องที่น่าดึงดูดใจที่จะถอดตัวควบคุมออกเพื่อประหยัดหลุมทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อเพลทใกล้เต็มแล้ว แต่โดยปกติแล้วการทำเช่นนั้นจะทำให้เกิดปัญหาในภายหลัง ผลลัพธ์จะอธิบายได้ยากขึ้นมากเมื่อไม่ทราบค่าพื้นหลัง

ควรมีการทำซ้ำทางเทคนิคด้วย เมื่อค่าที่ได้จากการทำซ้ำแตกต่างกันมาก จุดแรกที่ควรตรวจสอบคือ การใช้ปิเปต การผสม การจับเวลา และความใสของตัวอย่าง

มีชุดทดสอบใดบ้างที่สามารถใช้ควบคู่กับการทดสอบนี้ได้?

กิจกรรมยับยั้งเอนไซม์ทริปซินมักเป็นเพียงส่วนหนึ่งของงานวิจัยเท่านั้น

ชุดทดสอบกิจกรรมเอนไซม์ทริปซิน BC2310/BC2315 มีประโยชน์เมื่อโครงการต้องการวัดปริมาณเอนไซม์ทริปซินโดยตรง การทดสอบกิจกรรมของเอนไซม์และกิจกรรมของสารยับยั้งควบคู่กันไปจะช่วยแยกแยะสถานการณ์ที่แตกต่างกันสองสถานการณ์ ได้แก่ กิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินต่ำ และการยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินอย่างรุนแรง

ผลิตภัณฑ์อื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง ได้แก่ ชุดทดสอบกิจกรรมยับยั้งเอนไซม์แซนทีนออกซิเดส BC1020/BC1025, ชุดทดสอบกิจกรรมยับยั้งเอนไซม์อัลฟา-กลูโคซิเดส BC6380/BC6385 และชุดทดสอบกิจกรรมยับยั้งเอนไซม์เบตา-กาแลคโตซิเดส BC6450/BC6455

การทดสอบเหล่านี้มีประโยชน์ในงานคัดกรองที่ต้องเปรียบเทียบสารยับยั้งเอนไซม์หลายชนิดภายใต้ตัวอย่างหรือสภาวะการสกัดเดียวกัน นอกจากนี้ Solarbio ยังเผยแพร่ข้อมูลอัปเดตผลิตภัณฑ์และข้อมูลการใช้งานผ่านทางเว็บไซต์ของบริษัทด้วย ส่วนข่าววิจัย.

เหตุใดจึงควรใช้ Solarbio สำหรับการทดสอบประเภทนี้?

Solarbio เป็นผู้จัดจำหน่ายผลิตภัณฑ์สำหรับการวิจัยด้านวิทยาศาสตร์ชีวภาพมาตั้งแต่ปี 2547 ผลิตภัณฑ์ของบริษัทประกอบด้วยชุดทดสอบทางชีวเคมี แอนติบอดี ชุดทดสอบ ELISA สารเคมีสำหรับชีววิทยาของเซลล์ ผลิตภัณฑ์ย้อมสี สารมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์ สารตั้งต้นระดับโมเลกุล และสารประกอบโมเลกุลขนาดเล็ก

บริษัทดำเนินงานภายใต้ระบบการจัดการ ISO 13485, ISO 9001, ISO 14001 และ ISO 45001 ศูนย์ทดสอบของบริษัทได้รับการรับรองจาก CNAS รายละเอียดเพิ่มเติมเกี่ยวกับบริษัท การพัฒนาผลิตภัณฑ์ และระบบคุณภาพ สามารถดูได้ที่ [ที่อยู่เว็บไซต์บริษัท] เกี่ยวกับ Solarbio หน้าหนังสือ.

สำหรับการทดสอบเอนไซม์ตามปกติ สิ่งที่จำเป็นนั้นค่อนข้างพื้นฐาน ได้แก่ สารเคมีที่เสถียร ขั้นตอนการทดสอบที่ชัดเจน ตัวควบคุมที่ใช้งานได้ และผู้ที่สามารถตอบคำถามได้เมื่อตัวอย่างไม่แสดงพฤติกรรมตามที่คาดไว้ ซึ่งโดยปกติแล้วสิ่งเหล่านี้จะเป็นตัวตัดสินว่าการทดสอบครั้งที่สองจะตรงกับการทดสอบครั้งแรกหรือไม่

ข้อสรุป

การทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ทริปซินเป็นการวัดว่าตัวอย่างนั้นยับยั้งเอนไซม์ทริปซินได้มากน้อยเพียงใด เอนไซม์ทริปซินจะไฮโดรไลซ์ BAPNA และปล่อย p-NA สีเหลืองออกมา การยับยั้งที่มากขึ้นหมายถึงมี p-NA น้อยลง ดังนั้นค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตรจึงลดลง

วิธีการนี้สามารถใช้ได้กับถั่วเหลือง พืชตระกูลถั่ว เนื้อเยื่อพืช อาหาร อาหารสัตว์ สารยับยั้งที่บริสุทธิ์ และตัวอย่างทางชีวภาพ การเตรียมตัวอย่างและจังหวะเวลาต้องให้ความสำคัญ รวมถึงปฏิกิริยาว่างเปล่าและปฏิกิริยาควบคุมด้วย

ชุดทดสอบกิจกรรมยับยั้งเอนไซม์ทริปซิน BC6860/BC6865 ช่วยให้ห้องปฏิบัติการสามารถใช้การวิเคราะห์ด้วยสเปกโทรโฟโตเมตรีแบบง่ายๆ สำหรับงานวิจัยนี้ นักวิจัยที่ไม่แน่ใจเกี่ยวกับความเข้ากันได้ของตัวอย่าง สภาวะการสกัด หรือผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้อง สามารถใช้ชุดทดสอบนี้ได้ ติดต่อ Solarbio ก่อนที่จะเริ่มการทดลองครั้งแรก

คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: การทดสอบกิจกรรมยับยั้งเอนไซม์ทริปซินวัดอะไร?

A1: การทดสอบนี้ใช้วัดความสามารถของตัวอย่างในการลดกิจกรรมของเอนไซม์ทริปซิน ผลลัพธ์ที่ได้สะท้อนถึงการยับยั้งการทำงานมากกว่าปริมาณโปรตีนยับยั้งทั้งหมด

คำถามที่ 2: เหตุใดจึงใช้ BAPNA ในการทดสอบ?

A2: BAPNA เป็นสารตั้งต้นที่ให้สีสำหรับเอนไซม์ทริปซิน ทริปซินจะไฮโดรไลซ์ BAPNA และปล่อย p-nitroaniline สีเหลืองออกมา ซึ่งสามารถวัดได้ที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตร

คำถามที่ 3: ค่าการดูดกลืนแสงที่ต่ำกว่าหมายถึงการยับยั้งที่แรงกว่าหรือไม่?

A3: ใช่แล้ว เมื่อเอนไซม์ทริปซินถูกยับยั้งมากขึ้น การไฮโดรไลซิสของ BAPNA ก็จะน้อยลง และการผลิต p-nitroaniline ก็จะน้อยลงด้วย ดังนั้นค่าการดูดกลืนแสงจึงลดลง

คำถามที่ 4: สามารถทดสอบถั่วเหลืองและพืชตระกูลถั่วอื่นๆ ได้หรือไม่?

A4: ใช่ค่ะ สามารถนำถั่วเหลือง ถั่วเขียว ถั่วแดง และวัสดุจากพืชอื่นๆ มาทดสอบได้หลังจากการสกัดอย่างถูกต้อง ตัวอย่างที่มีสีหรือขุ่นควรมีตัวอย่างควบคุมที่เหมาะสมรวมอยู่ด้วย

Q5: เหตุใดผลการอ่านซ้ำจึงแตกต่างกัน?

A5: สาเหตุทั่วไป ได้แก่ การบดที่ไม่สม่ำเสมอ ข้อผิดพลาดในการใช้ปิเปต เวลาปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน การเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ การผสมที่ไม่ดี ความขุ่นของตัวอย่าง หรือการตั้งค่าตัวอย่างว่างเปล่าที่ไม่ถูกต้อง

Q6: กิจกรรมยับยั้งเอนไซม์ทริปซินเหมือนกับกิจกรรมของเอนไซม์ทริปซินหรือไม่?

A6: ไม่ใช่ครับ กิจกรรมของทริปซินวัดว่าเอนไซม์ย่อยสลายสารตั้งต้นได้ดีแค่ไหน ส่วนกิจกรรมของสารยับยั้งทริปซินวัดว่าตัวอย่างนั้นลดกิจกรรมของเอนไซม์ได้มากน้อยเพียงใด