วิธีเลือกสารละลายแช่แข็งเซลล์ที่เหมาะสมเพื่อให้เซลล์ฟื้นตัวได้ดีขึ้น

การรักษาสภาพเซลล์ให้คงที่ดูเหมือนจะเป็นงานในห้องปฏิบัติการที่ค่อนข้างง่าย แต่เป็นเรื่องน่าหงุดหงิดมากเมื่อเซลล์ที่มีคุณค่ามากไม่สามารถฟื้นตัวได้จากการเก็บรักษาในระยะยาว ในตอนแรกเซลล์ที่ละลายน้ำแข็งดูเหมือนจะปกติดีในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ละลายน้ำแข็งมาด้วย แต่ต่อมาเซลล์จะค่อยๆ เกาะติดกับก้นจานเพาะเลี้ยง เริ่มแบ่งตัวแต่ไม่สม่ำเสมอ หรือไม่แบ่งตัวเลย คนส่วนใหญ่จะโทษถังไนโตรเจนเหลวหรือวิธีการละลายน้ำแข็ง แต่บ่อยครั้งสาเหตุของปัญหาทั้งหมดนั้นอยู่ไกลกว่านั้นมาก

สภาพของเซลล์ก่อนการแช่แข็ง ระบบป้องกันการแข็งตัว การสัมผัสกับ DMSO ความหนาแน่นของการแช่แข็ง และตัวกลางในการแช่แข็ง ล้วนส่งผลต่อสิ่งที่เกิดขึ้นหลังจากการละลาย

ด้วยเหตุนี้ สารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์จึงไม่ควรถูกมองข้าม สูตรที่ดีต้องปกป้องเซลล์ในระหว่างการทำความเย็นโดยไม่สร้างความเครียดเพิ่มเติม Solarbio จัดจำหน่ายสารเคมีสำหรับชีววิทยาของเซลล์และผลิตภัณฑ์เพาะเลี้ยงที่เกี่ยวข้องผ่านเครือข่ายธุรกิจที่กว้างขวาง กลุ่มผลิตภัณฑ์ Solarbioรวมถึงสูตรการแช่แข็งแบบต่างๆ สำหรับเซลล์สายพันธุ์ทั่วไป เซลล์ที่ไวต่อความเย็น เซลล์ภูมิคุ้มกัน เซลล์ต้นกำเนิด และแบบจำลองการวิจัยอื่นๆ

เหตุใดสารละลายที่ใช้ในการแช่แข็งเซลล์จึงมีความสำคัญมาก?

ความเสียหายจากการแช่แข็งเริ่มขึ้นก่อนที่เซลล์จะถึงไนโตรเจนเหลว

เซลล์ไม่ได้เสียหายเพียงเพราะอุณหภูมิลดลง ปัญหาหลักคือการก่อตัวของน้ำแข็ง

ผลึกสามารถก่อตัวขึ้นภายในเซลล์และในช่องว่างระหว่างเซลล์ได้ ซึ่งอาจก่อให้เกิดความเสียหายร้ายแรงต่อเยื่อหุ้มเซลล์และโครงสร้างภายในของเซลล์ ในระหว่างการทำให้เย็นลง เซลล์จะได้รับความเครียดจากแรงดันออสโมติก น้ำจะเคลื่อนที่เข้าและออกจากเซลล์ ทำให้สารละลายภายนอกเซลล์โดยรอบมีความเข้มข้นเพิ่มมากขึ้นเรื่อยๆ

สารละลายสำหรับการแช่แข็งเซลล์ถูกออกแบบมาเพื่อลดความเครียดเหล่านี้ ทำให้เซลล์มีโอกาสรอดชีวิตทั้งในกระบวนการแช่แข็งและละลายได้ดีขึ้น

นักวิจัยที่ต้องการศึกษาภาพรวมของกระบวนการแช่แข็งทั้งหมด สามารถอ่านเพิ่มเติมได้ที่ คู่มือการแช่แข็งเซลล์: วิธีการแช่แข็งเซลล์และเก็บรักษาเซลล์สำรองให้ปลอดภัยซึ่งครอบคลุมถึงสภาวะของเซลล์ ความหนาแน่นของการแช่แข็ง การทำความเย็น การเก็บรักษา และการฟื้นตัวหลังการละลาย

DMSO มีประโยชน์ แต่ต้องใช้ด้วยความระมัดระวัง

DMSO เป็นสารป้องกันการแข็งตัวที่ใช้กันทั่วไปชนิดหนึ่งในการเพาะเลี้ยงเซลล์ Solarbio DMSO (ไดเมทิลซัลฟอกไซด์) (เกรดสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์) DMSO มักใช้ในงานเพาะเลี้ยงเซลล์ และสามารถแทรกซึมเข้าไปในเซลล์เพื่อลดการเกิดน้ำแข็งที่เป็นอันตรายระหว่างการทำความเย็น นั่นเป็นเหตุผลว่าทำไมสูตรการแช่แข็งแบบดั้งเดิมหลายสูตรจึงมี DMSO เป็นส่วนประกอบ

ส่วนที่เป็นประโยชน์และส่วนที่เป็นปัญหามาพร้อมกัน DMSO สามารถปกป้องเซลล์ที่อุณหภูมิต่ำได้ แต่การสัมผัสเป็นเวลานานที่อุณหภูมิห้องอาจลดความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์ได้ เมื่อผสมสารละลายแช่แข็งที่มี DMSO ลงในสารละลายเซลล์แล้ว ไม่ควรยืดเยื้อการจัดการโดยไม่จำเป็น

หากคุณต้องการสูตรสำเร็จรูปที่ใช้ได้เป็นประจำ สารละลายสำหรับการแช่แข็งแบบ Solarbio สามารถใช้เป็นส่วนประกอบของกระบวนการจัดเก็บเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมทั่วไปได้

ควรเลือกใช้สารหล่อเย็นแช่แข็งที่มีเซรั่มหรือไม่มีเซรั่มดี?

สูตรที่มีส่วนผสมของเซรั่มนั้นคุ้นเคยกันดี แต่รายละเอียดต่างๆ ยังไม่ชัดเจนนัก

สารละลายแช่แข็งที่มีซีรั่มเป็นส่วนประกอบยังคงใช้กันอย่างแพร่หลาย ส่วนผสมที่คุ้นเคยอย่างซีรั่มและ DMSO สามารถใช้ได้กับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายสายพันธุ์ และถูกนำมาใช้ในห้องปฏิบัติการมานานหลายปีแล้ว

ข้อจำกัดหลักของระบบนี้คือความแปรปรวนระหว่างแต่ละชุดการผลิต

ซีรัมประกอบด้วยโปรตีน ฮอร์โมน ปัจจัยการเจริญเติบโต ไขมัน และส่วนประกอบทางชีวภาพอื่นๆ อีกมากมาย ระดับของสารเหล่านี้อาจแตกต่างกันไปตามแหล่งที่มาและล็อตการผลิต เซลล์ที่ฟื้นตัวได้ดีเมื่อใช้ซีรัมจากล็อตหนึ่ง อาจมีพฤติกรรมที่แตกต่างออกไปหลังจากที่ห้องปฏิบัติการเปลี่ยนไปใช้ซีรัมจากล็อตอื่น

นอกจากนี้ยังมีโครงการบางโครงการที่ไม่ต้องการส่วนประกอบที่ได้จากสัตว์ เช่น งานวิจัยเกี่ยวกับเซลล์ต้นกำเนิด งานที่เกี่ยวข้องกับการบำบัดด้วยเซลล์ การศึกษาเกี่ยวกับเซลล์ภูมิคุ้มกันที่ละเอียดอ่อน และระบบการเพาะเลี้ยงที่ต้องการการควบคุมอย่างเข้มงวด ซึ่งมักจะได้รับประโยชน์จากสภาพแวดล้อมการแช่แข็งที่กำหนดไว้ชัดเจนกว่า

สื่อเพาะเลี้ยงที่ปราศจากซีรั่มช่วยให้ควบคุมระบบได้ง่ายขึ้น

สารละลายแช่แข็งแบบปราศจากซีรั่มช่วยขจัดความแปรปรวนที่เกิดจากซีรั่มในกระบวนการ ทำให้การกำหนดมาตรฐานโปรโตคอลการจัดเก็บเซลล์ในแต่ละชุดการผลิตและผู้ปฏิบัติงานทำได้ง่ายขึ้น

นอกจากนี้ยังช่วยประหยัดเวลา ไม่จำเป็นต้องเตรียมส่วนผสมของซีรัม/DMSO ทุกครั้งที่แช่แข็งเซลล์ สารละลายพร้อมใช้สามารถลดข้อผิดพลาดเล็กๆ น้อยๆ ในการเตรียมการที่อาจเกิดขึ้นได้ง่ายในระหว่างวันที่มีการเพาะเลี้ยงเซลล์อย่างวุ่นวาย

สำหรับนักวิจัยที่ยังต้องการใช้ DMSO ในสูตร แต่ต้องการกำจัดซีรัมออกไป สารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์แบบปราศจากซีรัม (ผสมฟีนอลเรด) มีตัวเลือกที่กำหนดไว้พร้อมตัวบ่งชี้ค่า pH ที่มองเห็นได้

สูตรลักษณะนี้สามารถนำไปใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ตามปกติได้ ในกรณีที่ความแปรปรวนของซีรัมเป็นสิ่งที่ต้องกังวล แต่การปกป้องเซลล์ด้วย DMSO ยังคงเป็นที่ยอมรับได้

ฟีนอลเรดมีความสำคัญในสารละลายสำหรับการแช่แข็งหรือไม่?

ฟีนอลเรดสามารถนำมาใช้ประโยชน์ได้ในงานประจำวัน

ฟีนอลเรดเป็นสารที่คุ้นเคยสำหรับผู้ที่ทำงานเกี่ยวกับอาหารเลี้ยงเซลล์ มันช่วยบ่งชี้การเปลี่ยนแปลงในสภาพแวดล้อมของอาหารเลี้ยงเซลล์ได้อย่างรวดเร็วด้วยสายตา

สำหรับงานแช่แข็งและฟื้นฟูขั้นพื้นฐานนั้น วิธีนี้อาจสะดวก มันไม่สามารถทดแทนการควบคุมค่า pH ที่ถูกต้องได้ แต่ช่วยให้ผู้ปฏิบัติงานมีข้อมูลอ้างอิงทางสายตาได้ทันทีในระหว่างการจัดการงานประจำวัน

ทางเลือกจะแตกต่างออกไปเมื่อการตรวจจับในขั้นตอนถัดไปมีความไวต่อสีพื้นหลัง

สูตรที่ปราศจากฟีนอลเรดเหมาะกับงานตรวจจับบางประเภทได้ดีกว่า

หากเซลล์ที่กู้คืนได้จะถูกนำไปใช้สำหรับการถ่ายภาพด้วยฟลูออเรสเซนซ์ การวัดโดยใช้สี หรือการทดสอบอื่น ๆ ที่การรบกวนจากพื้นหลังมีความสำคัญ ระบบที่ปราศจากฟีนอลเรดอาจเป็นที่ต้องการมากกว่า

โซลาร์บิโอ การแช่แข็งเซลล์แบบปราศจากซีรัม (ปราศจากฟีนอลเรด) ออกแบบมาเพื่อตอบสนองความต้องการประเภทนี้ ในขณะเดียวกันก็รักษาระบบการแช่แข็งให้ปราศจากซีรั่ม

ประเด็นสำคัญไม่ใช่การเลือกใช้ฟีนอลเรดหรือไม่ใช้ฟีนอลเรดเพียงเพราะว่าอย่างใดอย่างหนึ่งฟังดูทันสมัยกว่า ควรเลือกให้เหมาะสมกับงานที่จะทำหลังจากการละลายน้ำแข็ง การทดลองขยายเซลล์แบบมาตรฐานและการวิเคราะห์ทางแสงที่ละเอียดอ่อนไม่จำเป็นต้องใช้สูตรเดียวกันเสมอไป

การแช่แข็งเซลล์โดยปราศจาก DMSO นั้นเหมาะสมเมื่อใด?

เซลล์และกระบวนการทำงานบางอย่างต้องการระบบป้องกันการแข็งตัวที่แตกต่างออกไป

DMSO เป็นสารที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย แต่ไม่ได้หมายความว่าแบบจำลองเซลล์ทุกแบบจะต้องใช้สารนี้โดยอัตโนมัติ

เซลล์บางชนิดที่มีความไวต่อ DMSO จะฟื้นตัวได้ไม่ดี ในโครงการวิจัยอื่นๆ นักวิจัยต้องการลดปริมาณ DMSO ที่ตกค้างในเซลล์เพาะเลี้ยง ซึ่งอาจมีความสำคัญในงานวิจัยเกี่ยวกับเซลล์ต้นกำเนิด เซลล์ภูมิคุ้มกัน หรือการวิจัยที่การทำงานของเซลล์หลังการละลายน้ำแข็งมีความสำคัญมากกว่าการนับจำนวนเซลล์ที่รอดชีวิตเพียงอย่างเดียว

อาหารเลี้ยงเซลล์แบบปราศจาก DMSO ใช้สูตรป้องกันอื่นแทนการใช้ระบบ DMSO มาตรฐาน การเลือกใช้ขั้นสุดท้ายยังคงต้องทดสอบกับเซลล์แต่ละชนิดจริง เพราะ "ปราศจาก DMSO" ไม่ได้หมายความว่า "ดีกว่าสำหรับเซลล์ทุกชนิด" เสมอไป

สำหรับขั้นตอนการทำงานของเซลล์ต้นกำเนิดที่การหลีกเลี่ยง DMSO เป็นสิ่งจำเป็นอย่างยิ่ง สารละลายสำหรับการแช่แข็งสเต็มเซลล์ (ปราศจาก DMSO) เป็นหนึ่งในทางเลือกที่สามารถประเมินได้ผ่านการทดสอบการฟื้นตัวขนาดเล็กก่อนที่จะเตรียมธนาคารเซลล์ขนาดใหญ่ขึ้น

ควรประเมินเซลล์ที่ไวต่อการเปลี่ยนแปลงจากคุณภาพการฟื้นตัว ไม่ใช่จากตัวเลขเพียงตัวเดียว

ความสามารถในการอยู่รอดหลังการละลายน้ำแข็งนั้นมีประโยชน์ แต่ไม่ใช่ทั้งหมดของข้อมูล

เซลล์บางกลุ่มอาจแสดงค่าความมีชีวิตสูงทันทีหลังละลายน้ำแข็ง แต่ยังคงเจริญเติบโตได้ไม่ดีในช่วงสองวันถัดมา เซลล์ต้นกำเนิดอาจอยู่รอดได้ แต่สูญเสียคุณสมบัติที่จำเป็นสำหรับการเปลี่ยนแปลงไปเป็นเซลล์ชนิดอื่นในภายหลัง เซลล์ภูมิคุ้มกันอาจยังคงมีชีวิตอยู่ แต่แสดงการตอบสนองทางหน้าที่ที่อ่อนแอลง

ด้วยเหตุนี้ การฟื้นตัวจึงควรได้รับการตรวจสอบผ่านลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ พฤติกรรมการยึดเกาะหรือการลอยตัว การเพิ่มจำนวน และตัวบ่งชี้การทำงานหลักที่ใช้ในโครงการ

เอกลักษณ์ของเซลล์และประวัติการเพาะเลี้ยงก็มีความสำคัญเช่นกัน (จากงานวิจัยที่ตีพิมพ์ก่อนหน้านี้) สายเซลล์: ก้าวแรกสู่การวิจัยในหลอดทดลองที่น่าเชื่อถือ อธิบายว่าเหตุใดเชื้อตั้งต้นในระยะแรก การควบคุมการเพาะเลี้ยง เอกลักษณ์ของเซลล์ และสถานะของไมโคพลาสมา จึงมีความเชื่อมโยงอย่างใกล้ชิดกับการทำงานวิจัยในหลอดทดลองที่สามารถทำซ้ำได้

ควรเลือกสารละลายแช่แข็งอย่างไรสำหรับเซลล์แต่ละชนิด?

โดยทั่วไปแล้ว เซลล์ไลน์ที่ใช้กันทั่วไปมักต้องการความเรียบง่ายและสามารถทำซ้ำได้

สำหรับเซลล์ไลน์ที่ใช้กันทั่วไป เช่น A549, CHO, Jurkat และอื่นๆ อีกมากมายที่ใช้กันบ่อยในการวิจัย ข้อกำหนดหลักคือการฟื้นตัวของเซลล์และความง่ายของกระบวนการแช่แข็ง

การใช้สารละลายพร้อมใช้เป็นทางเลือกที่เหมาะสมเมื่อผู้ใช้งานหลายคนใช้ธนาคารเซลล์เดียวกัน ทุกคนใช้สูตรเดียวกัน ดังนั้นผลลัพธ์จึงขึ้นอยู่กับว่าใครเป็นผู้เตรียมสารละลายแช่แข็งในวันนั้นน้อยลง

สภาพเริ่มต้นของเซลล์ยังคงมีความสำคัญ เซลล์ที่อยู่ในระยะเจริญเติบโตอย่างแข็งแรงมักจะแช่แข็งได้ดีกว่าเซลล์ที่เจริญเติบโตมากเกินไป ปนเปื้อน หรืออยู่ในสภาวะเครียดจัด อาหารเลี้ยงเซลล์ที่ดีไม่สามารถแก้ไขสภาพเริ่มต้นของเซลล์ที่ไม่ดีได้

เซลล์ต้นกำเนิดและเซลล์ภูมิคุ้มกันต้องการความสนใจมากขึ้น

เซลล์ iPSC, เซลล์ต้นกำเนิดอื่นๆ, PBMC, เซลล์ NK, เซลล์ αβ-T, เซลล์ γδ-T และแบบจำลองเซลล์ภูมิคุ้มกันที่เกี่ยวข้อง มักมีข้อจำกัดมากกว่า

คำถามไม่ได้อยู่ที่ว่าเซลล์จะอยู่รอดได้หรือไม่เท่านั้น นักวิจัยอาจจำเป็นต้องรักษาคุณสมบัติของเซลล์ต้นกำเนิด ศักยภาพในการเปลี่ยนแปลงไปเป็นเซลล์ชนิดอื่น เครื่องหมายบนพื้นผิวเซลล์ การตอบสนองต่อไซโตไคน์ ความสามารถในการขยายตัว หรือคุณสมบัติการทำงานอื่นๆ ไว้ด้วย

นั่นคือเหตุผลที่สารละลายสำหรับการแช่แข็งเซลล์แบบเฉพาะเจาะจงหรือแบบเฉพาะการใช้งานจึงมีประโยชน์ Solarbio นำเสนอสูตรต่างๆ ที่ครอบคลุมความต้องการในการแช่แข็งเซลล์แบบทั่วไป แบบปราศจากซีรั่ม แบบมี DMSO แบบปราศจาก DMSO และความต้องการเฉพาะด้านอื่นๆ

เมื่อแบบจำลองนั้นผิดปกติ หรือมีหลายสูตรที่ใช้ได้ การเปรียบเทียบเล็กๆ จะประหยัดกว่าการค้นพบปัญหาหลังจากที่แช่แข็งเซลล์จำนวนมากไปแล้ว นักวิจัยสามารถใช้ บริการด้านเทคนิคของ Solarbio เพื่อการเลือกผลิตภัณฑ์และการสนับสนุนการใช้งานเมื่อจับคู่ระบบการแช่แข็งเซลล์กับแบบจำลองเซลล์เฉพาะ

ข้อสรุป

สารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์ที่ดีนั้นมีประโยชน์มากกว่าแค่การรักษาเซลล์ให้มีชีวิตอยู่ได้ในระหว่างการเก็บรักษา มันยังช่วยรักษาสภาพเริ่มต้นที่ใช้งานได้สำหรับการทดลองครั้งต่อไปอีกด้วย

สูตรที่มีซีรั่มยังคงใช้งานได้ดีสำหรับเซลล์ไลน์ทั่วไปหลายชนิด สื่อเพาะเลี้ยงที่ปราศจากซีรั่มช่วยลดความแปรปรวนที่เกิดจากซีรั่มและทำให้การเตรียมตัวอย่างมีความสม่ำเสมอมากขึ้น ผลิตภัณฑ์ที่ปราศจากฟีนอลเรดเหมาะสำหรับขั้นตอนการทำงานที่ไม่ต้องการสีพื้นหลัง สูตรที่ปราศจาก DMSO ช่วยให้ห้องปฏิบัติการมีทางเลือกเพิ่มเติมสำหรับเซลล์ที่ไวต่อสารเคมีหรือโครงการที่ต้องการลดการสัมผัสกับ DMSO

ไม่มีสารละลายแช่แข็งชนิดใดชนิดเดียวที่เหมาะสมที่สุดสำหรับเซลล์ทุกชนิด

เริ่มต้นด้วยชนิดของเซลล์และขั้นตอนการทดลอง ตรวจสอบสภาพของเซลล์เพาะเลี้ยงก่อนแช่แข็ง ควบคุมปริมาณ DMSO ที่เซลล์สัมผัสเมื่อมี DMSO อยู่ จากนั้นประเมินผลลัพธ์หลังการละลายน้ำแข็งโดยพิจารณาจากมากกว่าแค่ความมีชีวิตรอดในทันทีเพียงอย่างเดียว

เมื่อใช้สื่อที่เหมาะสมและการจัดการเซลล์ที่ดีร่วมกัน สต็อกแช่แข็งก็จะกลายเป็นสิ่งที่ควรจะเป็น: ตัวสำรองที่เชื่อถือได้ แทนที่จะเป็นแหล่งความไม่แน่นอนอีกแหล่งหนึ่ง

คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: จุดประสงค์หลักของสารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์คืออะไร?

A1: สารละลายสำหรับแช่แข็งเซลล์ช่วยปกป้องเซลล์จากการก่อตัวของผลึกน้ำแข็ง ความเครียดจากแรงดันออสโมติก และความเสียหายอื่นๆ ในระหว่างการทำความเย็นและการเก็บรักษาในสภาพแช่แข็ง จุดประสงค์คือเพื่อเพิ่มอัตราการรอดชีวิตและการฟื้นตัวของหน้าที่การทำงานหลังจากละลายน้ำแข็ง

คำถามที่ 2: สารละลายแช่แข็งเซลล์แบบปราศจากซีรัมดีกว่าสารละลายแช่แข็งเซลล์แบบมีซีรัมหรือไม่?

A2: ไม่ใช่ทุกกรณี สื่อเพาะเลี้ยงเซลล์แบบปราศจากซีรั่มมีสูตรที่แน่นอนกว่าและลดความแปรปรวนของซีรั่มในแต่ละล็อต สูตรที่มีซีรั่มก็ยังใช้ได้ดีกับเซลล์ไลน์ทั่วไปหลายชนิด การเลือกใช้ที่ดีที่สุดขึ้นอยู่กับแบบจำลองของเซลล์และการใช้งานขั้นต่อไปที่ต้องการ

คำถามที่ 3: เหตุใดจึงใช้ DMSO ในการแช่แข็งเซลล์?

A3: DMSO ทำหน้าที่เป็นสารป้องกันการแข็งตัว มันจะแทรกซึมเข้าไปในเซลล์และช่วยลดการก่อตัวของผลึกน้ำแข็งที่เป็นอันตรายระหว่างการทำความเย็น เนื่องจาก DMSO อาจส่งผลต่อความมีชีวิตของเซลล์ในระหว่างการสัมผัสกับอุณหภูมิที่สูงขึ้นเป็นเวลานาน การจัดการเซลล์จึงควรมีประสิทธิภาพหลังจากเติม DMSO แล้ว

คำถามที่ 4: เมื่อใดจึงควรพิจารณาใช้สารหล่อเย็นที่ปราศจาก DMSO?

A4: สูตรที่ปราศจาก DMSO อาจมีประโยชน์สำหรับเซลล์ที่ไวต่อ DMSO การวิจัยเซลล์ต้นกำเนิด กระบวนการทำงานของเซลล์ภูมิคุ้มกัน หรือการทดลองที่ DMSO ที่ตกค้างอาจส่งผลต่อการใช้งานในภายหลัง ควรตรวจสอบการกู้คืนด้วยเซลล์ประเภทจริงอีกครั้ง

Q5: ฟีนอลเรดมีผลต่อการแช่แข็งเซลล์หรือไม่?

A5: ฟีนอลเรดเป็นสารบ่งชี้ค่า pH เป็นหลัก ไม่ใช่ส่วนประกอบหลักในการปกป้องเซลล์จากการแช่แข็ง สูตรที่ปราศจากฟีนอลเรดอาจเป็นที่ต้องการมากกว่าเมื่อจะนำเซลล์ที่กู้คืนมาใช้ในการทดสอบที่ไวต่อสีหรือการเรืองแสง

Q6: สามารถใช้สารละลายแช่แข็งเดียวกันสำหรับเซลล์ iPSC, PBMC, เซลล์ NK และเซลล์สายพันธุ์ทั่วไปได้หรือไม่?

A6: สูตรทั่วไปบางสูตรอาจใช้ได้กับเซลล์หลายประเภท แต่เซลล์ที่ไวต่อสภาวะเฉพาะมักต้องการสภาวะที่เฉพาะเจาะจงมากกว่า เซลล์ iPSC, PBMC, เซลล์ NK, เซลล์ T และเซลล์ชนิดพิเศษอื่นๆ ควรได้รับการทดสอบความมีชีวิตและการทำงานหลังการละลายน้ำแข็งก่อนที่จะจัดเตรียมธนาคารเซลล์ขนาดใหญ่

Q7: เหตุใดเซลล์จึงยังฟื้นตัวได้ไม่ดีแม้ว่าจะใช้สารละลายแช่แข็งที่ดีแล้วก็ตาม?

A7: ปัญหาอาจเริ่มต้นก่อนการแช่แข็ง เซลล์ที่หนาแน่นเกินไป การปนเปื้อน ความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์ต่ำก่อนการแช่แข็ง การย่อยสลายมากเกินไป ความหนาแน่นของเซลล์ที่ไม่เหมาะสม การสัมผัสกับ DMSO เป็นเวลานาน การควบคุมการทำความเย็นที่ไม่ดี หรือวิธีการละลายที่ไม่ถูกต้อง ล้วนสามารถลดอัตราการฟื้นตัวของเซลล์ได้

Q8: ควรตรวจสอบอะไรบ้างหลังจากละลายเซลล์แช่แข็งแล้ว?

A8: ตรวจสอบความมีชีวิตรอด รูปร่าง การยึดเกาะหรือพฤติกรรมการลอยตัว การเพิ่มจำนวน และตัวบ่งชี้การทำงานที่สำคัญต่างๆ เซลล์ที่ไวต่อการเปลี่ยนแปลงอาจต้องใช้เวลา 24 ถึง 72 ชั่วโมงก่อนที่สภาพการฟื้นตัวที่แท้จริงจะปรากฏชัดเจน