คำอธิบายเกี่ยวกับแท็กโปรตีนทั่วไป: His, GST, MBP, FLAG และแท็กเรืองแสง

แท็กถูกใช้เพื่อวัตถุประสงค์หลายอย่างในระหว่างการแสดงออกของโปรตีนลูกผสม โดยช่วยในการทำให้บริสุทธิ์ การระบุ และการศึกษาปฏิสัมพันธ์ของโปรตีน หากคุณเคยทำงานกับโปรตีนลูกผสม คุณคงเคยเจอแท็ก His, แท็ก GST, แท็ก MBP หรือแท็ก FLAG มาบ้างแล้ว แท็กเหล่านี้ถูกระบุไว้ในเวกเตอร์การแสดงออกที่ใช้ในการสร้างโปรตีนลูกผสม ในโปรโตคอลที่ใช้ในการทำให้บริสุทธิ์ และในแอนติบอดีที่ใช้ในการตรวจจับโปรตีนนั้น

แม้ว่าโปรตีนจะแสดงแถบการแสดงออกที่ชัดเจนบน SDS-PAGE แต่การทำให้บริสุทธิ์อาจทำได้ยากมาก โปรตีนอาจก่อตัวเป็นกลุ่มก้อนขนาดใหญ่ที่ไม่ละลายน้ำ หรือหลังจากที่ทำให้บริสุทธิ์ได้สำเร็จด้วยความช่วยเหลือของแอนติบอดีแล้ว โปรตีนอาจไม่ทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีนั้นตามที่คาดไว้

มีการใช้แท็กโปรตีนที่แตกต่างกันเพื่อวัตถุประสงค์ที่แตกต่างกัน การทราบคุณสมบัติของแท็กจะช่วยให้สามารถวางแผนการทดลองที่สนใจได้ก่อนที่จะสั่งซื้อสารเคมีที่จำเป็น ซึ่งจะช่วยลดปัญหาที่อาจเกิดขึ้นได้หลายประการ

โปรตีนแท็กคืออะไร และใช้เพื่ออะไร?

วิธีการทำงานของโปรตีนที่มีแท็ก

โปรตีนแท็กคือเปปไทด์ขนาดสั้นหรือโปรตีนขนาดใหญ่กว่านั้น ซึ่งถูกเชื่อมเข้ากับโปรตีนเป้าหมายโดยใช้เทคโนโลยีดีเอ็นเอลูกผสม

โปรตีนลูกผสมที่ได้นั้นประกอบด้วยเป้าหมายที่สนใจและแท็ก คุณสมบัติของแท็กช่วยให้สามารถนำไปใช้ในการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ เพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีน การตรวจจับด้วยแอนติบอดีในเวสเทิร์นบลอต และการใช้งานอื่นๆ รวมถึงโปรตีนที่มีแท็กยังสามารถติดตามได้ในเซลล์อีกด้วย

สามารถติดแท็กโปรตีนเข้ากับปลาย N-terminus หรือปลาย C-terminus ของโปรตีนเป้าหมายได้ ขึ้นอยู่กับโครงสร้างของโปรตีนและจุดประสงค์ของการทดลอง จะต้องเลือกตำแหน่งการติดแท็กที่เหมาะสมที่สุด

แท็กขนาดเล็กมีผลกระทบต่อขนาดโดยรวมของโปรตีนน้อยมาก ในทางตรงกันข้าม แท็กขนาดใหญ่สามารถส่งผลต่อการพับตัว ความสามารถในการละลาย และปฏิกิริยาของโปรตีนได้

การเลือกแท็กโปรตีนนั้นไม่ใช่แค่การหาเวกเตอร์แสดงออกที่เหมาะสมสำหรับแท็กนั้นเท่านั้น

การเลือกแท็กโดยพิจารณาจากเป้าหมายของการทดลอง

ก่อนที่คุณจะเลือกแท็กสำหรับนิพจน์ คุณต้องพิจารณาก่อนว่าคุณต้องการทำอะไรกับนิพจน์นั้น

สำหรับการทำให้บริสุทธิ์โดยอาศัยความสัมพันธ์ทางเคมีตามปกติ แท็ก His ก็เพียงพอแล้ว ในขณะที่สำหรับปัญหาเรื่องการละลาย แท็ก GST และ MBP จะมีประโยชน์มาก สำหรับการตรวจจับโดยใช้แอนติบอดี แท็ก FLAG มักถูกใช้บ่อยในการตรวจจับโปรตีนที่สนใจ แท็กเรืองแสงมีประโยชน์มากสำหรับการศึกษาตำแหน่งของโปรตีน

แท็กเปปไทด์ขนาดสั้นและคู่พันธะฟิวชั่นขนาดใหญ่มีผลต่อความสามารถในการละลาย การทำให้บริสุทธิ์ และการทำงานของโปรตีนแตกต่างกัน แท็กขนาดเล็ก เช่น His และ FLAG โดยทั่วไปจะเพิ่มน้ำหนักโมเลกุลน้อยกว่า ในขณะที่คู่พันธะขนาดใหญ่ เช่น GST และ MBP อาจช่วยเพิ่มการแสดงออกของโปรตีนบางชนิดในรูปที่ละลายได้ การเลือกที่เหมาะสมที่สุดขึ้นอยู่กับเป้าหมายของการทดลองและคุณสมบัติของโปรตีนเป้าหมาย

ไม่มีแท็กโปรตีนใดที่เหมาะสมที่สุดสำหรับโปรตีนทุกชนิด การเลือกใช้แท็กมักขึ้นอยู่กับเกณฑ์หลายประการ รวมถึงระบบโฮสต์สำหรับการแสดงออกของโปรตีน ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ในขั้นตอนถัดไป และระดับความจำเป็นที่โปรตีนที่แสดงออกจะต้องคงไว้ซึ่งกิจกรรมทางชีวภาพตามธรรมชาติ

แท็ก His และแท็ก GST สำหรับการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์

แท็กของเขา: แท็กขนาดเล็กสำหรับโครมาโทกราฟีแบบแอฟฟินิตี

แท็ก His เป็นหนึ่งในแท็กโปรตีนที่ใช้กันมากที่สุดในการผลิตโปรตีนลูกผสม

แท็ก 6×His ทั่วไปคือลำดับของกรดอะมิโนฮิสติดีน 6 ตัว คือ HHHHHH ขนาดที่เล็กของแท็ก 6×His ทำให้เหมาะสมเพราะไม่เพิ่มน้ำหนักให้กับโปรตีนเป้าหมายมากเกินไป

โปรตีนที่มีแท็ก His มักถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้โครมาโทกราฟีแบบจับยึดโลหะที่ตรึงอยู่กับที่ หรือที่รู้จักกันในชื่อ IMAC

ในการโครมาโทกราฟีแบบอาศัยแรงดึงดูดของโปรตีนลูกผสมที่ติดแท็กฮิสติดีนนั้น หมู่ฮิสติดีนของโปรตีนลูกผสมจะทำปฏิกิริยากับไอออนโลหะ เช่น นิกเกลหรือโคบอลต์ ซึ่งยึดติดอยู่กับเมทริกซ์โครมาโทกราฟี หลังจากล้างสิ่งเจือปนออกไปแล้ว โปรตีนลูกผสมที่จับอยู่จะถูกชะออกมาโดยใช้บัฟเฟอร์ที่มีอิมิดาโซลและสภาวะการชะอื่นๆ ที่เหมาะสม

แท็กของเขาเป็นหนึ่งในแท็กที่ใช้กันมากที่สุดสำหรับการแสดงออกของโปรตีนในแบคทีเรีย โดยเฉพาะในแบคทีเรีย E. coli

นอกเหนือจากการแสดงออกของโปรตีนที่เพียงพอแล้ว การเข้าถึงของแท็ก His ก็มีความสำคัญต่อการจับกับเรซินด้วย แท็ก His ที่ฝังอยู่ภายในจะไม่สามารถจับกับเรซินได้ และอาจนำไปสู่ผลลัพธ์การทำให้บริสุทธิ์ที่แย่มาก

นอกจากนี้ องค์ประกอบของบัฟเฟอร์อาจรบกวนกระบวนการทำให้บริสุทธิ์โดยอาศัยความสัมพันธ์กับโลหะ เช่น โดยสารคีเลตหรือส่วนประกอบอื่นๆ ในบัฟเฟอร์

แท็ก GST: การปรับปรุงความสามารถในการละลายและการทำให้บริสุทธิ์

GST คือแท็กโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 26 กิโลดาลตัน เรียกว่า กลูตาไธโอน เอส-ทรานสเฟอเรส

แท็ก GST มักใช้ในระบบการแสดงออกของโปรคาริโอต โปรตีนลูกผสมบางชนิดจะละลายได้ดีขึ้นหลังจากติดแท็ก GST และสามารถทำให้บริสุทธิ์ได้โดยใช้โครมาโทกราฟีแบบอาศัยความสัมพันธ์กับกลูตาไธโอน

โปรดทราบว่า ในขณะที่แท็ก His ขนาดเล็กโดยปกติจะสร้างคู่ฟิวชั่นที่มีขนาดค่อนข้างเล็ก แต่คู่ฟิวชั่น GST จะสร้างคู่ฟิวชั่นที่มีขนาดค่อนข้างใหญ่ ซึ่งอาจมีประโยชน์มากหากโปรตีนเป้าหมายไม่เสถียรหรือละลายไม่ได้ด้วยตัวมันเอง

Solarbio นำเสนอ โปรตีน GST Tag รีคอมบิแนนท์ (P02337) สำหรับการวิจัยที่เกี่ยวข้องกับโปรตีน

การศึกษาปฏิสัมพันธ์ของโปรตีนสามารถทำได้โดยใช้โปรตีนฟิวชั่น GST โดยสามารถใช้โปรตีนเหล่านี้ในการทดสอบ GST pull-down แบบดั้งเดิม หลังจากนั้นโปรตีนที่ติดแท็กจะถูกยึดติดกับเรซินกลูตาไธโอน จากนั้นโปรตีนทั้งหมดที่ทำปฏิกิริยากับโปรตีนที่ติดแท็กจะถูกล้างออกออกจากโปรตีนอื่นๆ ที่ยึดติดกับเรซินอื่นๆ และตรวจจับได้โดยใช้ Western blot

ในทางปฏิบัติ การใช้ GST มีข้อจำกัดอยู่บ้าง โปรตีนอาจเกิดการรวมตัวเป็นไดเมอร์ และขนาดของแท็กอาจส่งผลต่อโครงสร้างหรือกิจกรรมของโปรตีนเป้าหมาย

สามารถใส่ตำแหน่งตัดของโปรตีเอสที่เหมาะสมลงในคู่ฟิวชั่นระหว่างการออกแบบโครงสร้าง เพื่อกำจัดแท็ก GST ออกหลังจากการทำให้บริสุทธิ์ หากจำเป็นและไม่รบกวนการทดลองของคุณ

MBP Tag และ FLAG Tag ในงานวิจัยโปรตีนลูกผสม

แท็ก MBP: ตัวเลือกที่มีประโยชน์สำหรับโปรตีนที่ละลายได้ยาก

โปรตีนจับมอลโทส (Maltose-binding protein, MBP) คือโปรตีนขนาด 40 กิโลดาลตัน ซึ่งใช้เป็นตัวบ่งชี้สำหรับโปรตีนที่สร้างขึ้นในแบคทีเรียในรูปของโปรตีนลูกผสม (fusion protein)

MBP สามารถปรับปรุงความสามารถในการละลายที่เห็นได้ชัดของโปรตีนลูกผสมบางชนิดที่ใช้ MBP ในการผลิตได้

การแสดงออกของโปรตีนยูคาริโอตใน E. coli อาจเป็นเรื่องท้าทายเนื่องจากการพับตัวที่ไม่ถูกต้องและการก่อตัวของโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำ ซึ่งสามารถช่วยได้โดยการใช้แท็ก 6xHis

โปรตีนลูกผสม MBP สามารถทำให้บริสุทธิ์ได้โดยใช้โครมาโทกราฟีแบบอาศัยความสัมพันธ์กับอะไมโลสเช่นกัน

โปรตีน MBP Tag แบบรีคอมบิแนนท์ (P02841) มีจำหน่ายจาก Solarbio ในชื่อ Recombinant Tag Proteins

การที่โปรตีนของคุณละลายได้ดีขึ้น ไม่ได้หมายความว่ามันพับตัวอย่างถูกต้องหรือว่ามันทำงานได้เต็มที่แล้ว

ทดสอบการทำงานของโปรตีนลูกผสมของคุณในฐานะโปรตีนบริสุทธิ์ และอย่าพึ่งพาปริมาณโปรตีนที่ยังคงอยู่ในสารละลายในรูปของโปรตีนลูกผสมเพียงอย่างเดียว

แท็ก FLAG: การตรวจจับแอนติบอดีขนาดเล็กและสะดวก

FLAG เป็นแท็กเปปไทด์ขนาดสั้นมาก ประกอบด้วยกรดอะมิโน 8 ตัว และมีลำดับเป็น DYKDDDDK

เมื่อเปรียบเทียบกับ GST และ MBP แล้ว FLAG เป็นแท็กที่เพิ่มน้ำหนักโมเลกุลให้กับโปรตีนลูกผสมเพียงเล็กน้อยเท่านั้น

ข้อได้เปรียบหลักของแท็กที่จับกับแอนติบอดี เช่น แท็ก FLAG คือการจดจำแอนติเจนที่เกี่ยวข้องโดยแอนติบอดีจำเพาะได้อย่างสะดวก โปรตีนที่มีแท็ก FLAG สามารถตรวจจับได้โดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน FLAG และทำให้บริสุทธิ์ได้โดยใช้เมทริกซ์ความสัมพันธ์ต่อต้าน FLAG ที่เหมาะสม

คุณสมบัติของแท็ก FLAG ทำให้สามารถนำไปใช้ในการทำเวสเทิร์นบลอตติ้ง การตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกัน และในการศึกษาโปรตีนเชิงซ้อนได้

นอกจากจะทำหน้าที่เป็นลวดลายการจดจำสำหรับแอนติบอดีต่อ FLAG แล้ว ลำดับ FLAG ยังมีลวดลายการจดจำสำหรับเอนไซม์เอ็นเทอโรไคเนส ซึ่งสามารถใช้ในการตัดแท็กออกจากโปรตีนลูกผสมได้ หากสร้างโปรตีนลูกผสมที่ถูกต้องและใช้สภาวะการตัดที่เหมาะสม

นักวิจัยที่กำลังมองหาผลิตภัณฑ์แท็กแบบรีคอมบิแนนท์ที่เกี่ยวข้อง สามารถพิจารณาโปรตีนแท็ก FLAG แบบรีคอมบิแนนท์ (P02839) ได้

แม้ว่าแท็ก FLAG จะมีขนาดเล็ก แต่ควรวางตำแหน่งโดยคำนึงถึงโดเมนการทำงานที่ใกล้ที่สุด เนื่องจากอาจส่งผลต่อปฏิกิริยาของโปรตีนกับโมเลกุลอื่นๆ หรือแม้กระทั่งการเข้าถึงของแอนติบอดีตรวจจับได้

การทดสอบสารตรวจจับในรูปแบบปลาย N และปลาย C สามารถแก้ปัญหาการตรวจจับได้โดยไม่ต้องสร้างแอนติบอดี

แท็กโปรตีนเรืองแสงสำหรับการระบุตำแหน่งและการตรวจจับ

GFP สายพันธุ์ต่างๆ และแท็ก mCherry

สามารถใช้แท็กโปรตีนเรืองแสงเพื่อสังเกตตำแหน่งและติดตามการเคลื่อนที่ของโปรตีนลูกผสมโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงได้

ตัวอย่างที่พบได้ทั่วไป ได้แก่ eGFP, eCFP, eYFP และ mCherry

โปรตีนเรืองแสงทุกชนิดมีค่าสูงสุดของการกระตุ้นและการปล่อยแสงที่แตกต่างกัน ดังนั้นจึงสามารถเลือกช่องทางการถ่ายภาพที่แตกต่างกันสำหรับโปรตีนแต่ละชนิดได้ ในบางครั้ง อาจสามารถตรวจสอบโปรตีนมากกว่าหนึ่งชนิดในการทดลองเดียวกันได้ด้วย

mCherry เป็นโปรตีนเรืองแสงสีแดงที่มักใช้ในการสร้างโปรตีนลูกผสมเพื่อศึกษาตำแหน่งของโปรตีน โซลาร์บิโอ นำเสนอโปรตีน mCHERRY Tag แบบรีคอมบิแนนท์ (P02838) สำหรับการวิจัย

การติดแท็กด้วยสารเรืองแสงสามารถใช้เพื่อระบุตำแหน่งของโปรตีนภายในเซลล์และศึกษาการขนส่งโปรตีน นอกจากนี้ยังสามารถใช้เพื่อตรวจสอบว่าการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกของยีนหรือโปรตีนส่งผลต่อการกระจายตัวของโปรตีนภายในเซลล์อย่างไร

อย่างไรก็ตาม โปรดทราบว่าการเรืองแสงอย่างง่ายไม่ได้หมายความว่าโปรตีนนั้นทำงานได้เสมอไป โปรตีนเรืองแสงขนาดใหญ่เช่นนี้อาจรบกวนการทำงานของโปรตีนได้ ขึ้นอยู่กับตำแหน่งของมันภายในโปรตีนนั้น

ในการวิเคราะห์ภาพ ต้องพิจารณาถึงการแสดงออกของยีน ความสมบูรณ์ของการเรืองแสง และการเรืองแสงพื้นหลังด้วยเช่นกัน

การจับคู่โปรตีนแท็กแบบรีคอมบิแนนท์กับแอนติบอดีแท็ก

เหตุใดแอนติบอดีแบบแท็กจึงมีความสำคัญ

การใช้แอนติบอดีแบบ "ติดแท็ก" ยังเป็นวิธีที่สะดวกมากในการตรวจจับโปรตีนลูกผสม แทนที่จะต้องสร้างแอนติบอดีใหม่สำหรับเป้าหมายแต่ละตัว

สามารถศึกษาโปรตีนที่ไม่เกี่ยวข้องกันได้โดยใช้โปรตีนหลายชนิดที่มีแท็ก GST เดียวกัน และสามารถตรวจจับได้โดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน GST ที่เหมาะสม

โซลาร์บิโอ แอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้าน GST Tag (K200006M) ออกแบบมาเพื่อตรวจจับ GST-tag ในการใช้งานทดลองที่เข้ากันได้ นักวิจัยควรตรวจสอบความเหมาะสมของแอนติบอดีโดยพิจารณาจากวิธีการทดสอบที่ต้องการและข้อมูลการตรวจสอบความถูกต้องของผลิตภัณฑ์

นอกเหนือจากแอนติบอดีที่ระบุไว้ข้างต้นแล้ว เรายังมีผลิตภัณฑ์อื่นๆ อีกด้วย แอนติบอดีโพลีโคลนอลต่อต้านแท็ก GST, แอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้าน MBP Tagแอนติบอดีโพลีโคลนอลต่อต้าน MBP Tag และ แอนติบอดีโพลีโคลนอลต่อต้านแฟลกแท็ก.

แอนติบอดีโมโนโคลนอลและโพลีโคลนอลมีประโยชน์อย่างมากในการใช้งานที่หลากหลาย แต่พวกมันจดจำอีพิโทปที่แตกต่างกันและมีคุณสมบัติที่แตกต่างกัน

การเลือกใช้แอนติบอดีจำเป็นต้องคำนึงถึงวิธีการทดลอง สภาพแวดล้อมในการเตรียมตัวอย่าง และความสามารถในการเข้าถึงแท็กฟิวชั่นด้วย

ความจำเพาะของแอนติบอดี การเข้าถึงของเอพิโทป และวิธีการผลิตแอนติบอดี สามารถส่งผลต่อการตรวจจับโปรตีนที่มีการติดแท็กได้ เทคโนโลยีแอนติบอดีลูกผสมยังเป็นทางเลือกในการพัฒนาสารตรวจจับที่มีคุณสมบัติการจับที่กำหนดไว้

การตรวจจับโปรตีนฟิวชั่นเรืองแสงด้วยแอนติบอดี

โปรตีนเรืองแสงสามารถตรวจจับได้ด้วยแอนติบอดีที่จำเพาะต่อแท็กเช่นกัน

วิธีนี้มีประโยชน์มากในหลายสถานการณ์ เช่น เมื่อสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์อ่อนมาก เมื่อตัวอย่างได้รับการประมวลผลสำหรับการทำเวสเทิร์นบลอตติ้งแล้ว หรือเพียงเพื่อเป็นวิธีการเพิ่มเติมในการตรวจสอบการแสดงออกของโปรตีน

สำหรับการตรวจจับโปรตีนที่ติดแท็ก mCherry นั้น แอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้าน mCherry Tag (K200015M) สามารถใช้ผลิตภัณฑ์จาก Solarbio ได้

นอกจากนี้ เรายังจัดจำหน่ายผลิตภัณฑ์รีคอมบิแนนท์มัลติแท็กอีกหลายรายการ รวมถึงโปรตีนรีคอมบิแนนท์แท็ก-5 (P06425) และโปรตีนรีคอมบิแนนท์แท็ก-9 (P06426)

ผลิตภัณฑ์เหล่านี้เป็นการรวมกันของลำดับแท็กทั่วไป สามารถนำไปใช้ในโครงการวิจัยใดๆ ที่เกี่ยวข้องกับการจดจำแท็กหรือระบบตรวจจับที่เกี่ยวข้องได้

ควรตรวจสอบให้แน่ใจเสมอว่าผลิตภัณฑ์นั้นเหมาะสมกับแอนติบอดีและการใช้งานที่คุณใช้ในการทดลองของคุณ

ปัญหาทั่วไปเมื่อทำงานกับโปรตีนที่มีการติดแท็ก

การแสดงออกในระดับสูงไม่ได้หมายความว่าการทำให้บริสุทธิ์จะง่ายเสมอไป

ข้อผิดพลาดอย่างหนึ่งที่มักเกิดขึ้นคือการเลือกแท็กที่โดยทั่วไปแล้วให้ผลลัพธ์การแสดงออกสูง

แม้ว่าจะมีการแสดงออกของโปรตีนในระดับสูง แต่ก็ยังสามารถเกิดการรวมตัวกันเป็นก้อนหรือสารที่จับตัวกันเป็นก้อนในระหว่างกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ได้

โปรตีนลูกผสม MBP หรือ GST อาจมีประโยชน์หากปัญหาหลักที่ต้องการแก้ไขคือเรื่องการละลาย อย่างไรก็ตาม หากโปรตีนของคุณละลายได้อยู่แล้วและคุณต้องการเพียงแค่การทำให้บริสุทธิ์อย่างง่าย โปรตีนที่มีแท็ก His ขนาดเล็กกว่าอาจเป็นตัวเลือกที่ดีกว่า

การแสดงออก การเหนี่ยวนำ สภาวะบัฟเฟอร์ และการทำให้บริสุทธิ์ ล้วนมีผลต่อผลลัพธ์

สำหรับลูกค้าที่ไม่สามารถจัดตั้งระบบการแสดงออกที่เหมาะสมในห้องปฏิบัติการของตนได้ Solarbio ยังให้บริการเพิ่มเติมอีกด้วย บริการวิจัยที่เกี่ยวข้องกับการแสดงออกของโปรตีน รวมถึงการผลิตและการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนลูกผสม

สัญญาณแอนติบอดีที่อ่อนแอหลังการแสดงออก

หากโปรตีนที่ติดแท็กด้วยอีพิโทปไม่สามารถตรวจจับได้ด้วยแอนติบอดี ให้ตรวจสอบก่อนว่าแอนติบอดีนั้นมีข้อบกพร่องหรือไม่!

แท็กอาจไม่สามารถเข้าถึงได้ โปรตีนลูกผสมอาจเสื่อมสภาพ หรืออาจมีการแสดงออกต่ำกว่าที่คาดไว้

ตรวจสอบน้ำหนักโมเลกุลที่คำนวณได้ของโปรตีนที่แสดงออก และตรวจสอบว่ามีบริเวณที่มีแท็กอยู่หรือไม่

นอกจากนี้ การใช้ตัวควบคุมเชิงบวกและเชิงลบที่เหมาะสมในเวสเทิร์นก็มีประโยชน์เช่นกัน หากแอนติบอดีที่รู้จักโปรตีนที่มีแท็ก แต่ไม่รู้จักตัวอย่างทดลอง ปัญหาอาจอยู่ที่โปรตีนลูกผสมหรือการเตรียมตัวอย่าง

ข้อสรุป

แท็ก His, GST, MBP, FLAG และแท็กอื่นๆ ถูกนำมาใช้เพื่อแก้ปัญหาประเภทต่างๆ ในงานวิจัยด้านโปรตีน

สำหรับกระบวนการทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ความสัมพันธ์ทางเคมีทั่วไป โปรตีนที่มีแท็ก His นั้นสะดวกที่สุด ในโครงการการแสดงออกโปรตีนที่ซับซ้อน โปรตีนที่มีแท็ก GST และ MBP มักจะสามารถแสดงออกร่วมกับโปรตีนที่สนใจได้ในรูปแบบฟิวชั่น โปรตีนที่แสดงออกโดยมีแท็ก FLAG สามารถทำให้บริสุทธิ์และตรวจจับได้ด้วยแอนติบอดีจำเพาะ แท็กเรืองแสงช่วยให้สามารถระบุตำแหน่งของโปรตีนในเซลล์ที่มีชีวิตได้

การเลือกแท็กยังหมายถึงการเลือกวัสดุสำหรับการทำให้บริสุทธิ์และแอนติบอดีตรวจจับที่เหมาะสมด้วย

Solarbio ให้บริการโปรตีนแท็กแบบรีคอมบิแนนท์ แอนติบอดีจำเพาะต่อแท็ก และบริการการแสดงออกของโปรตีน เพื่อสนับสนุนงานวิจัยด้านโปรตีนรีคอมบิแนนท์ สำหรับการเลือกผลิตภัณฑ์หรือความช่วยเหลือทางเทคนิค นักวิจัยสามารถระบุโปรตีนเป้าหมาย ระบบการแสดงออก ข้อกำหนดในการทำให้บริสุทธิ์ และการใช้งานขั้นปลายที่ต้องการได้

คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: แท็ก His กับแท็ก GST ต่างกันอย่างไร?

A1: แท็ก His เป็นเปปไทด์ขนาดเล็กที่มักประกอบด้วยกรดอะมิโนฮิสติดีน 6 ตัว ในขณะที่ GST เป็นโปรตีนที่มีขนาดประมาณ 26 กิโลดาลตัน แท็ก His มักใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์โดยอาศัยโลหะ แท็ก GST ช่วยในการทำให้บริสุทธิ์โดยอาศัยกลูตาไธโอน และอาจช่วยเพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีนได้ แม้ว่าขนาดที่ใหญ่กว่าอาจส่งผลต่อพฤติกรรมของโปรตีนก็ตาม

คำถามที่ 2: โปรตีนแท็กชนิดใดดีที่สุดสำหรับการเพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีนรีคอมบิแนนท์?

A2: MBP และ GST เป็นแท็กที่ใช้กันทั่วไปสำหรับโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำ MBP มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับโปรตีนยูคาริโอตที่แสดงออกในแบคทีเรีย อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์อาจแตกต่างกันไปตามโปรตีนแต่ละชนิด และแม้แต่โปรตีนชนิดเดียวกันในเวอร์ชันที่แตกต่างกัน ดังนั้นจึงควรทดสอบโครงสร้างฟิวชั่นที่แตกต่างกันหลายแบบ

Q3: โปรตีนที่ติดแท็ก FLAG สามารถตรวจจับได้ด้วยวิธี Western blot หรือไม่?

A3: ใช่ โปรตีนที่มีแท็ก FLAG สามารถตรวจจับได้โดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน FLAG ที่เหมาะสมในการทดลอง Western blotting หรือ immunoprecipitation ลำดับเปปไทด์สั้นๆ ของแท็ก FLAG ช่วยให้แอนติบอดีสามารถจดจำได้อย่างจำเพาะ การตรวจจับโปรตีนที่มีแท็ก FLAG จำเป็นต้องใช้แอนติบอดีที่เข้ากันได้ รวมถึงการเตรียมตัวอย่างที่เหมาะสมด้วย