세포 배양 상층액, 혈청 및 혈장 샘플에서 인간 IL-23 ELISA 검출

IL-23은 염증, Th17 생물학, 면역 활성화, 자가면역 질환, 감염 및 종양 면역 연구에서 자주 측정되는 사이토카인입니다. IL-23은 IL-23/IL-17 축의 핵심 구성 요소이므로 IL-17A, IL-22, GM-CSF와 같은 관련 매개체와 함께 평가되는 경우가 많습니다. 연구 질문에 따라 추가적인 경로 표지자를 분석할 수도 있습니다.

ELISA 검사 자체는 복잡하지 않지만, 전처리 및 생물학적 변수가 결과에 큰 영향을 미칠 수 있습니다. 세포 종류, 자극 조건, 배양 기간, 시료 처리 및 보관, 그리고 예상되는 IL-23 농도 모두 측정값에 영향을 줄 수 있습니다. 건강한 공여자의 혈청이나 혈장에서는 IL-23 농도가 검사법의 검출 한계 미만일 수 있지만, 적절하게 자극된 IL-23 생성 세포 배양에서는 쉽게 측정 가능한 농도를 얻을 수 있습니다.

다음 예시들은 말초혈액 세포 제제, THP-1 세포, Jurkat 세포, 혈청 및 혈장을 포함합니다. 또한, 각 모델이 IL-23 측정에 적합한 정도가 동일하지 않으며, 결과는 세포 유형 및 자극 조건의 맥락에서 해석해야 한다는 중요한 점을 보여줍니다.

인간 IL-23이란 무엇인가요?

IL-23은 두 개의 서로 다른 하위 구성 요소로 이루어져 있습니다.

인간 IL-23은 IL-12 사이토카인 계열에 속합니다. 이는 단일 사슬 단백질이 아니라 이종이량체입니다.

IL-23은 IL23A 유전자에 의해 코딩되는 p19 소단위와 IL12B 유전자에 의해 코딩되는 p40 소단위로 구성됩니다. 인간의 p19 전구체는 189개의 아미노산으로 이루어져 있습니다. p40 소단위는 IL-12와 공유되며, p19와 p40은 이황화 결합으로 연결된 이종이량체를 형성하여 생물학적으로 활성인 IL-23을 만듭니다.

이 구조는 검출에 중요합니다. 완전한 형태의 IL-23을 측정하기 위한 분석법은 검증된 특이성에 따라 p19/p40 이종이량체를 관련 IL-12 계열 단백질 및 분리된 소단위체와 구별해야 합니다. 따라서 검사 전에 종 특이성 및 표적 특이성을 확인해야 합니다.

Solarbio는 사이토카인 검출 제품 및 기타 제품을 공급합니다. 면역학 연구 솔루션 세포 기반 연구 및 샘플 기반 연구에 사용됩니다.

IL-23은 Th17 면역반응 유지에 도움을 줍니다.

IL-23은 IL-23R과 IL-12Rβ1로 구성된 이종이량체 수용체를 통해 신호를 전달합니다. 이 수용체는 활성화된 CD4+ T 세포와 기억 CD4+ T 세포를 포함한 여러 반응성 면역 세포 집단에 발현됩니다.

IL-23 수용체 결합은 JAK2/TYK2 관련 신호전달을 활성화시키고, 주로 STAT3를 활성화시키며, 많은 세포 환경에서 STAT4는 상대적으로 적은 정도로 기여합니다. 이러한 신호전달은 RORγt 발현 및 IL-17A, IL-22, GM-CSF 생성 등을 포함하는 Th17 효과기 프로그램을 지원합니다.

IL-23은 미분화 T세포 분화의 유일한 개시자 역할을 하기보다는 Th17 세포의 유지, 증식 및 병원성 효과 기능에 특히 중요합니다. 이러한 이유로 IL-23은 만성 염증, 자가면역 기전, 감염 및 종양 면역 연구에서 자주 측정됩니다.

더 넓은 네트워크를 연구하는 연구자들은 Solarbio의 도구를 사용할 수 있습니다. 신호 전달 경로 부분 관련 표적 및 경로 생성물을 찾기 위해.

말초혈액 세포 배양에서 IL-23은 어떻게 평가해야 할까요?

LPS 자극에는 적절한 세포 준비가 필요합니다.

LPS 유도 IL-23 실험에는 정제된 말초혈액 림프구보다는 사람 말초혈액 단핵세포(PBMC) 또는 단핵구 및 기타 항원 제시 세포를 포함하는 다른 제제가 더 적합합니다. IL-23은 주로 활성화된 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포에서 생성되며, 사람 혈액 세포 제제에서의 LPS 반응은 주로 선천성 LPS 감지 경로에 의존합니다. 만약 원재료가 "말초혈액 림프구"로 기록되어 있다면, 결과를 해석하기 전에 분리 방법과 단핵구 함량을 확인해야 합니다.

본 실험 설정에서는 세포를 24시간 또는 96시간 동안 배양한 후 배양 상층액을 수집하여 인간 IL-23을 측정했습니다. LPS 농도를 50 ng/mL 및 1 μg/mL로 사용하는 경우, 이는 일반적인 권장 용량이 아닌 연구별 실험 조건으로 간주해야 합니다.

두 가지 LPS 농도와 두 가지 채집 시간을 사용하면 총 네 가지 자극 조건을 설정할 수 있습니다. 비교는 동일한 시점에서 수행해야 하며, 각 시점마다 자극을 가하지 않은 대조군을 포함해야 합니다.

이번 연구 결과는 단순히 고용량과 저용량을 비교하는 것으로 해석해서는 안 됩니다. 96시간 배양 과정에서 영양분 고갈, 세포 밀도 변화, 세포 사멸, 세포 구성 변화, 사이토카인 분해 또는 소모 등 여러 요인이 상층액에서 측정된 농도에 영향을 미칠 수 있습니다.

각 시점마다 동일한 배양 조건에서 자극을 주지 않은 대조군을 유지해야 합니다. 이 대조군이 없으면 LPS 유도 분비를 기저 분비 또는 배양액 내 시간 경과에 따른 변화와 확실하게 구분할 수 없습니다.

문화적 세부 사항은 일관성을 유지해야 합니다.

배양 과정의 작은 변화도 사이토카인 측정값에 큰 차이를 초래할 수 있습니다. 초기 세포 밀도, 혈청 비율, 총 배양량, LPS 준비, 배양 조건 및 채집 방법은 모든 그룹에서 동일하게 유지해야 합니다. 일차 혈액 세포 실험의 경우, 단핵구 함량의 차이가 LPS 유도 IL-23에 큰 영향을 미칠 수 있으므로 공여자 출처와 세포 분리 방법 또한 기록해야 합니다.

채취 후 모든 상층액은 일관된 방식으로 처리해야 합니다. 신선한 시료와 여러 번 냉동-해동 과정을 거친 시료를 비교하는 것은 피해야 합니다.

솔라바이오의 연구 제품군 이 책은 ELISA 키트, 세포 배양 시약, 자극제 및 면역 세포 실험에 사용되는 기타 제품을 다룹니다.

THP-1 세포에서 IL-23 검출은 어떻게 이루어지나요?

LPS 자극을 이용한 단핵구 세포 모델

인간 단핵구 백혈병 세포주인 THP-1은 선천성 면역 신호 전달 및 염증 연구를 위한 재현성 모델로 널리 사용됩니다. 일차 인간 혈액 세포는 생물학적으로 중요하지만 기증자 간 변이가 있고 체외 수명이 제한적입니다. THP-1 세포는 일차 세포 실험을 보완할 수 있지만, 자동으로 대체해서는 안 됩니다.

이 예에서 THP-1 세포는 10% 태아 소 혈청이 첨가된 RPMI-1640 배지에서 배양되었습니다. LPS는 최종 농도 50 ng/mL 및 500 ng/mL로 첨가되었습니다.

배양 상층액은 24시간 및 48시간 후에 수집하여 인간 IL-23 검출 여부를 검사하였다.

두 가지 LPS 농도를 자동으로 "중간" 및 "강함"으로 분류해서는 안 됩니다. THP-1 세포의 LPS 반응성은 세포 상태, 분화 정도, 세포 밀도, 혈청 조건 및 수용체 발현에 따라 달라지며, LPS 농도가 높다고 해서 IL-23 반응이 비례적으로 더 높거나 해석하기 쉬운 것은 아닙니다.

THP-1 결과는 원발성 세포 검사 결과와 동일하게 취급해서는 안 됩니다.

THP-1 세포와 인간 일차 단핵구 또는 말초혈액 단핵세포(PBMC)는 기원이나 생물학적 특성이 다릅니다. 이들의 수용체 발현, 활성화 상태, 성장 패턴 및 LPS에 대한 반응은 다를 수 있습니다.

THP-1 세포에서 얻은 결과는 THP-1 모델의 맥락에서 우선적으로 해석되어야 합니다. 이 결과를 인간 일차 면역 세포에서 얻은 데이터를 직접적으로 대체하는 용도로 사용해서는 안 됩니다.

분석 신호가 약하거나, 표준 곡선이 비정상적으로 보이거나, 반복 측정 결과가 일치하지 않을 경우 Solarbio는 다음과 같은 방법을 제시합니다. 기술 서비스 팀 제품 선택 및 기본 테스트 조건을 검토하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Jurkat 세포는 IL-23 분비 연구에 적합한 모델인가?

PMA 자극에 대한 해석은 신중해야 합니다.

주르캇 세포는 T세포 신호전달 연구에 널리 사용되는 인간 T세포 백혈병 세포주입니다. 그러나 활성화된 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포가 분비형 이종이량체 IL-23의 주요 공급원이므로, 주르캇 세포는 IL-23의 표준적인 양성 생산 모델이 아닙니다.

본 실험 설정에서는 PMA를 최종 농도 0.2 μg/mL 및 10 μg/mL로 3일 또는 5일 동안 처리한 후 상층액을 수집했습니다. 이는 Jurkat 세포에 대해 강하고 장기간의 자극 조건이므로 일반적으로 권장되는 IL-23 유도 조건으로 제시해서는 안 됩니다. 이러한 조건에서 얻은 IL-23 신호는 자극을 가하지 않은 대조군 및 세포 생존율 데이터와 함께 해석해야 합니다.

농도 범위가 넓고 노출 기간이 여러 날에 걸쳐 진행되기 때문에 세포 생존력, 증식 및 세포 상태의 변화가 측정 결과에 큰 영향을 미칠 수 있어 단순한 용량-반응 관계 해석이 어렵습니다.

세포 생존율과 세포 수는 실험 전반에 걸쳐, 특히 고농도 PMA 처리 시 및 장시간 노출 후 모니터링해야 합니다. ELISA 신호가 검출되었다고 해서 Jurkat 세포가 생리학적으로 적합한 IL-23 생성 모델이라고 단정할 수는 없습니다. 예상치 못한 양성 결과는 적절한 대조군을 사용하여 확인하고, 필요한 경우 다른 방법을 통해 검증해야 합니다.

자극제와 세포 유형은 연구 목표와 일치해야 합니다.

LPS와 PMA는 서로 대체할 수 있는 자극제가 아닙니다. LPS는 반응성 선천성 면역 세포에서 TLR4 의존성 신호 전달을 활성화하는 반면, PMA는 단백질 키나아제 C 의존성 경로를 직접 활성화하며 여러 세포 모델에서 신호 전달을 유발하는 데 일반적으로 사용됩니다.

실험 목적에 따라 세포 모델과 자극 물질을 결정해야 합니다. THP-1 세포 또는 일차 단핵구 계열 세포는 LPS에 대한 선천 면역 반응 연구에 사용할 수 있습니다. PMA로 처리한 Jurkat 세포는 T세포 신호 전달 연구에 유용할 수 있지만, 그렇다고 해서 Jurkat 세포가 IL-23 분비의 검증된 모델이라는 의미는 아닙니다. ELISA 결과는 선택한 모델의 생물학적 특성을 고려하여 해석해야 합니다.

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정상 혈청과 혈장에서 IL-23이 검출되지 않는 이유는 무엇일까요?

결과가 검출 한계 미만일 수 있습니다.

이 샘플 패널에서는 정상인 혈장 샘플 20개와 ​​정상인 혈청 샘플 20개를 검사했으며, 모든 샘플에서 IL-23은 검사법의 검출 한계 미만이었습니다.

이 결과는 IL-23이 완전히 존재하지 않았다는 것을 증명하는 것이 아닙니다. 사용된 분석 조건에서, 존재하더라도 분석법에서 명시된 검출 한계 미만이었다는 것을 의미합니다.

IL-23을 포함한 많은 사이토카인은 건강한 사람의 체내에서 매우 낮은 농도로 순환할 수 있습니다. 측정된 농도는 면역 상태, 염증 또는 감염, 약물 복용, 연령, 검체 처리 및 기타 생물학적 또는 전처리 요인의 영향을 받을 수 있습니다.

검출 한계 미만의 결과가 나왔다고 해서 반드시 분석이 실패한 것은 아닙니다. 먼저 검정 곡선, 공시료 및 대조 용액의 성능, 시료 처리, 분석 절차를 검토해야 합니다. 분석 성능이 허용 가능한 수준이라면 정확한 농도를 제시하는 대신 검출 한계 미만으로 보고하거나 제조사에서 지정한 보고 기준에 따라 보고해야 합니다.

혈청과 혈장은 서로 다른 기질입니다.

혈청과 혈장을 자동으로 하나의 분석 그룹으로 묶어서는 안 됩니다. 두 검체의 준비 방법이 다르고, 매트릭스 효과가 분석 성능에 영향을 미칠 수 있기 때문입니다.

채혈 튜브, 혈장용 항응고제, 혈청 응고 조건, 원심분리 시간, 보관 온도 및 동결-해동 횟수 등 모든 사항을 기록해야 합니다. 이러한 변수들은 목표 농도가 검사 결과 보고 가능 범위의 하한선에 가까울 때 특히 중요해집니다.

어떤 IL-23 ELISA 키트가 샘플에 적합합니까?

인간 IL-23 ELISA 키트

The SEKH-0034 인간 IL-23 ELISA 키트 이 제품은 현재 제품 설명서에 따라 혈청, 혈장 및 세포 배양 상층액을 포함한 검증된 인체 샘플 유형에서 인간 IL-23을 정량적으로 검출하는 데 사용할 수 있습니다.

본 제품은 염증 연구, Th17 관련 연구, 면역 세포 자극, 자가면역 기전, 감염 및 종양 면역과 관련이 있습니다.

SEKH-0034 인간 IL-23 ELISA 키트는 현재 제품 설명서에 명시된 검증된 시료 매트릭스와 함께 사용해야 합니다. 검사 전에 예상 농도를 고려하여 검증된 희석 절차를 통해 시료가 분석 결과 보고 가능 범위 내에 있거나, 해당 범위 내로 조절할 수 있도록 해야 합니다.

다른 종용 IL-23 키트

SEKM-0024 마우스 IL-23 ELISA 키트 생쥐 샘플용으로 제작되었습니다. SEKR-0072 쥐 IL-23 ELISA 키트 쥐 샘플에 사용됩니다. SEKCN-0130 닭 IL-23 ELISA 키트 닭 연구에 이용 가능합니다.

한 종을 위해 제작된 키트는 교차 반응성 테스트를 거쳐 확인되지 않은 한 다른 종에 사용해서는 안 됩니다. 단백질 이름이 유사하다고 해서 분석 항체가 동일한 방식으로 표적을 인식하는 것은 아닙니다.

마우스 IL-23 ELISA 키트 및 기타 종 특이적 키트는 연구에 사용되는 동물 모델에 따라 선택해야 합니다.

베이징 솔라바이오 과학기술 유한회사는 2004년에 설립되었으며 면역학, 세포생물학, 분자생물학 및 생화학 분야의 제품을 개발합니다. 제품 및 품질 시스템에 대한 자세한 정보는 웹사이트에서 확인할 수 있습니다. 솔라바이오 회사 페이지.

최종 결과를 읽기 전에 무엇을 확인해야 할까요?

표준 곡선부터 시작하세요.

검정 곡선은 키트에 명시된 허용 기준을 충족해야 하며 권장되는 곡선 맞춤 방법을 사용해야 합니다. 반복 측정된 값은 분석법에 명시된 정밀도 범위 내에서 일치해야 합니다.

바탕 흡광도는 낮게 유지되어야 합니다. 바탕 흡광도가 높으면 세척이 불완전하거나, 오염되었거나, 시약을 잘못 다루었거나, 배양 시간이 너무 길었을 수 있습니다.

분석법의 보고 가능 상한값을 초과하는 신호가 나타난 시료는 프로토콜에서 허용하는 경우 희석하여 재검사해야 합니다. 정량 하한값 미만의 결과는 정확한 농도로 보고해서는 안 되며, 검출 한계 미만의 결과는 그에 따라 보고해야 합니다.

시료 준비 과정을 되돌아보세요

예상치 못한 IL-23 수치가 나오면 연구자들은 종종 키트 자체에 문제가 있는 것은 아닌지 의심하게 되지만, 이러한 불일치의 원인은 검사 과정의 더 초기 단계에서 발생했을 수도 있습니다.

세포 밀도가 그룹 간에 차이가 있었거나, 자극제가 잘못 준비되었거나, 상층액에 세포 파편이 포함되어 있을 수 있습니다. 혈청 또는 혈장 샘플이 반복적인 동결-해동 과정을 거쳤을 가능성도 있습니다.

피펫팅, 세척, 배양 시간 및 온도, 마이크로플레이트 판독기 설정 또한 일관성이 있어야 합니다. ELISA는 특히 사이토카인 농도가 낮을 ​​때 취급상의 차이에 민감합니다.

결론

인간 IL-23 측정은 염증 및 면역 반응 연구에 유용한 정보를 제공할 수 있지만, 측정된 농도는 전체 실험 설계의 맥락에서 해석되어야 합니다.

LPS 유도 IL-23 연구에는 정제된 림프구보다 단핵구를 포함하는 말초혈액 단핵세포(PBMC), 일차 단핵구 또는 수지상 세포, 그리고 적절하게 특성화된 골수계 세포 모델이 생물학적으로 더 적합합니다. THP-1 세포는 검증된 배양 조건에서 LPS를 사용하여 평가할 수 있습니다. Jurkat 세포는 PMA 유도 T세포 신호 전달 연구에 유용할 수 있지만, 검증 없이는 표준 IL-23 분비 모델로 제시해서는 안 됩니다.

정상 혈청 및 혈장에서는 IL-23 수치가 검출 한계 미만으로 나타날 수 있습니다. 이는 검사 대조군과 표준 곡선이 정상적으로 작동하는 경우 유효한 결과일 수 있습니다.

종 일치, 시료 처리, 배양 일관성 및 분석 실행은 모두 최종 결과에 영향을 미칩니다. 키트 선택 또는 테스트 조건에 대한 질문이 있는 경우 연구원들은 분석 시작 전에 Solarbio에 문의할 수 있습니다.

FAQ는

Q1: 인간 IL-23이란 무엇인가요?

A1: 인간 IL-23은 IL-12 계열에 속하는 염증 유발성 이종이량체 사이토카인입니다. 이는 IL-23A 유전자가 코딩하는 p19 소단위와 IL-12B 유전자가 코딩하는 p40 소단위로 구성됩니다.

Q2: IL-23이 Th17 세포와 연관되는 이유는 무엇입니까?

A2: IL-23은 IL-23R과 IL-12Rβ1로 구성된 수용체 복합체를 통해 신호를 전달합니다. 이는 JAK2/TYK2 관련 신호 전달을 활성화시키며, Th17 관련 반응에서 STAT3가 주요 하위 STAT 신호 전달 물질입니다.

Q3: 세포 배양 상층액에서 인간 IL-23을 검출할 수 있습니까?

A3: 네. 세포 배양 상층액은 세포 모델이 IL-23을 생성할 수 있고 시료 유형이 ELISA 키트에 대해 검증된 경우 검사할 수 있습니다. 단핵구를 포함하는 말초혈액 단핵세포(PBMC), 일차 단핵구/대식세포/수지상세포, 그리고 적절하게 특성화된 골수 세포 모델은 일반적으로 정제된 림프구 또는 Jurkat 세포보다 IL-23 분비 연구에 더 적합합니다.

질문 4: LPS를 IL-23 실험에 사용할 수 있습니까?

A4: 네. LPS는 단핵구, 대식세포, 수지상세포, 단핵구를 포함하는 말초혈액 단핵세포 제제 및 일부 골수 세포 모델을 포함한 반응성 선천성 면역 세포에서 IL-23 생성을 자극할 수 있습니다. 그러나 정제된 림프구에서 IL-23 분비를 유도한다고 가정해서는 안 됩니다.

Q5: PMA를 Jurkat 세포와 함께 사용할 수 있습니까?

A5: PMA는 Jurkat 세포를 활성화시킬 수 있으며 T 세포 신호 전달 연구에 유용하지만, Jurkat 세포는 분비형 IL-23의 표준적인 양성 대조군이 아닙니다. 따라서 PMA로 처리한 Jurkat 세포 배양 상층액을 뒷받침하는 데이터 없이 검증된 IL-23 양성 대조군으로 제시해서는 안 됩니다.

질문 6: 정상 혈청이나 혈장에서 IL-23이 때때로 검출되지 않는 이유는 무엇입니까?

A6: IL-23은 검사 검출 한계 미만의 농도로 존재할 수 있습니다. 이는 정상 검체에서 저농도로 존재하는 사이토카인에서 흔히 나타나는 현상입니다.

Q7: 마우스 IL-23 ELISA 키트로 사람 샘플을 검사할 수 있습니까?

A7: 아니요. 제조사에서 교차 반응성을 특별히 검증하지 않은 경우, 인체 샘플은 인체 IL-23 ELISA 키트를 사용하여 검사해야 합니다.

Q8: 중복된 웰의 결과가 일치하지 않을 경우 무엇을 확인해야 합니까?

A8: 피펫팅 정확도, 시료 혼합, 세척, 배양 시간, 플레이트 위치, 기포 및 시약 준비를 모두 검토해야 합니다.