الكشف عن إنترلوكين-23 البشري باستخدام مقايسة ELISA في عينات من سوائل مزارع الخلايا، والمصل، والبلازما

يُعدّ الإنترلوكين-23 (IL-23) سيتوكينًا يُقاس بشكل متكرر في دراسات الالتهاب، وبيولوجيا الخلايا التائية المساعدة 17 (Th17)، وتنشيط المناعة، وأمراض المناعة الذاتية، والعدوى، ومناعة الأورام. ولأن IL-23 عنصر أساسي في محور IL-23/IL-17، فإنه غالبًا ما يُقيّم جنبًا إلى جنب مع وسائط أخرى ذات صلة مثل IL-17A وIL-22 وGM-CSF. كما يمكن تحليل مؤشرات مسارات إضافية تبعًا للسؤال البيولوجي المطروح.

إجراء اختبار ELISA بحد ذاته ليس معقدًا بالضرورة؛ إلا أن المتغيرات ما قبل التحليلية والبيولوجية قد تؤثر بشكل كبير على النتيجة. فنوع الخلية، وظروف التحفيز، ومدة الاستزراع، ومعالجة العينة وتخزينها، وتركيز IL-23 المتوقع، كلها عوامل تؤثر على القيمة المقاسة. في مصل أو بلازما المتبرعين الأصحاء، قد يكون تركيز IL-23 أقل من قدرة الاختبار على الكشف، بينما يمكن لمزارع الخلايا المنتجة لـ IL-23، بعد تحفيزها بشكل مناسب، أن تعطي تراكيز قابلة للقياس بسهولة.

تتضمن الأمثلة التالية مستحضرات خلايا الدم المحيطية، وخلايا THP-1، وخلايا جركات، والمصل، والبلازما. كما توضح نقطة مهمة: لا تتساوى ملاءمة كل نموذج لقياس IL-23، ويجب تفسير النتائج في سياق نوع الخلية وظروف التحفيز.

ما هو الإنترلوكين-23 البشري؟

يتكون IL-23 من وحدتين فرعيتين مختلفتين

ينتمي الإنترلوكين-23 البشري إلى عائلة السيتوكينات IL-12. وهو عبارة عن ثنائي غير متجانس وليس بروتينًا أحادي السلسلة.

يتكون الإنترلوكين-23 من وحدة فرعية p19 مشفرة بواسطة جين IL23A ووحدة فرعية p40 مشفرة بواسطة جين IL12B. يبلغ طول طليعة p19 البشرية 189 حمضًا أمينيًا. تشترك الوحدة الفرعية p40 مع الإنترلوكين-12، وتتحد p19 وp40 لتكوين ثنائي غير متجانس مرتبط بروابط ثنائية الكبريتيد لتشكيل الإنترلوكين-23 النشط بيولوجيًا.

يُعدّ هذا التركيب مهمًا للكشف. يجب أن يميز الفحص المُصمّم لقياس IL-23 الكامل بين ثنائي الوحدات غير المتجانس p19/p40 وبروتينات عائلة IL-12 ذات الصلة والوحدات الفرعية المعزولة، وذلك وفقًا لخصوصية الفحص المُثبتة. لذا، ينبغي التأكد من خصوصية النوع والهدف قبل إجراء الاختبار.

تُوفر شركة Solarbio منتجات الكشف عن السيتوكينات وغيرها حلول أبحاث علم المناعة للدراسات القائمة على الخلايا والدراسات القائمة على العينات.

يساعد IL-23 في الحفاظ على استجابة Th17

يُرسل IL-23 إشاراته من خلال مستقبل غير متجانس يتكون من IL-23R و IL-12Rβ1. ويتم التعبير عن هذا المستقبل على العديد من مجموعات الخلايا المناعية المستجيبة، بما في ذلك الخلايا التائية CD4+ المنشطة والخلايا التائية الذاكرة.

يؤدي ارتباط مستقبل IL-23 إلى تنشيط مسار الإشارات المرتبط بـ JAK2/TYK2، وبشكل أساسي STAT3، بينما يساهم STAT4 بدرجة أقل في العديد من السياقات الخلوية. يدعم هذا المسار برنامج الخلايا التائية المساعدة 17 (Th17)، بما في ذلك التعبير عن RORγt وإنتاج IL-17A وIL-22 وGM-CSF.

يُعدّ الإنترلوكين-23 (IL-23) ذا أهمية خاصة للحفاظ على خلايا Th17 وتكاثرها ووظيفتها المرضية المؤثرة، بدلاً من كونه المحفز الوحيد لتكوين الخلايا التائية الساذجة. ولهذا السبب، يُقاس مستوى IL-23 غالبًا في دراسات الالتهاب المزمن، وآليات المناعة الذاتية، والعدوى، ومناعة الأورام.

يمكن للباحثين الذين يدرسون الشبكة الأوسع استخدام Solarbio قسم مسار الإشارات لإيجاد الأهداف والمنتجات ذات الصلة بالمسار.

كيف ينبغي تقييم IL-23 في مزارع خلايا الدم المحيطية؟

يتطلب تحفيز الخلايا باستخدام LPS تحضيرًا مناسبًا للخلايا

في تجربة تحفيز إنتاج الإنترلوكين-23 بواسطة الليبوبوليسكاريد (LPS)، تُعدّ الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي البشري (PBMCs) أو أي مستحضر آخر يحتوي على الخلايا الوحيدة أو خلايا أخرى عارضة للمستضدات أكثر ملاءمة من الخلايا اللمفاوية النقية في الدم المحيطي. يُنتَج الإنترلوكين-23 بشكل أساسي بواسطة الخلايا الوحيدة المُنشَّطة، والبلعميات، والخلايا المتغصنة، وتعتمد استجابات الليبوبوليسكاريد في مستحضرات خلايا الدم البشرية بشكل كبير على مسارات استشعار الليبوبوليسكاريد الفطرية. إذا سُجِّلَت المادة الأصلية على أنها "خلايا لمفاوية من الدم المحيطي"، فينبغي التحقق من طريقة العزل ومحتوى الخلايا الوحيدة قبل تفسير النتيجة.

في إعداد الاختبار الموصوف هنا، زُرعت الخلايا لمدة 24 أو 96 ساعة، وجُمع السائل الطافي من المزرعة لقياس مستوى إنترلوكين-23 البشري. إذا استُخدمت تراكيز من عديد السكاريد الشحمي (LPS) تبلغ 50 نانوغرام/مل و1 ميكروغرام/مل، فينبغي التعامل معها كظروف تجريبية خاصة بالدراسة وليست جرعات موصى بها عالميًا.

باستخدام تركيزين مختلفين من الليبوبوليسكاريد (LPS) ووقتين مختلفين لجمع العينات، ينتج عن التصميم أربع حالات تحفيزية. ينبغي إجراء المقارنات عند نقاط زمنية متطابقة، مع وجود عينة تحكم غير محفزة لكل نقطة زمنية.

لا ينبغي تفسير النتائج على أنها مجرد مقارنة بسيطة بين جرعة عالية وجرعة منخفضة. فخلال فترة زراعة مدتها 96 ساعة، يمكن أن يؤدي استنفاد المغذيات، والتغيرات في كثافة الخلايا، وموت الخلايا، والتحولات في تركيب الخلايا، وتحلل السيتوكينات أو استهلاكها، إلى تغيير التركيز المقاس في السائل الطافي.

ينبغي الحفاظ على عينة تحكم غير محفزة في ظل ظروف استزراع متطابقة عند كل نقطة زمنية. وبدون هذه العينة، لا يمكن التمييز بشكل موثوق بين الإفراز المحفز بواسطة الليبوبوليسكاريد والإفراز القاعدي أو التغيرات الزمنية في بيئة الاستزراع.

يجب أن تظل تفاصيل الثقافة متسقة

قد تُحدث تغييرات طفيفة في التعامل مع المزارع الخلوية اختلافات كبيرة في قياسات السيتوكينات. لذا، ينبغي الحفاظ على ثبات كثافة الخلايا الأولية، ونسبة المصل، والحجم الكلي للمزرعة، وطريقة تحضير الليبوبوليسكاريد، وظروف الحضانة، وطريقة جمع الخلايا بين المجموعات. وفي تجارب خلايا الدم الأولية، يجب أيضًا تسجيل مصدر المتبرع وطريقة عزل الخلايا، لأن الاختلافات في محتوى الخلايا الوحيدة قد تؤثر بشكل كبير على إنتاج الإنترلوكين-23 المُحفز بالليبوبوليسكاريد.

ينبغي معالجة جميع السوائل الطافية بشكل موحد بعد جمعها. تجنب مقارنة عينة طازجة بعينة خضعت لعدة دورات من التجميد والذوبان.

سولاربيو مجموعة منتجات البحث يغطي هذا المنتج مجموعات اختبار ELISA، وكواشف زراعة الخلايا، والمحفزات، وغيرها من المنتجات المستخدمة في تجارب الخلايا المناعية.

كيف يعمل الكشف عن IL-23 في خلايا THP-1؟

نموذج خلية وحيدة النواة مع تحفيز LPS

يُستخدم خط خلايا سرطان الدم النخاعي الأحادي البشري THP-1 على نطاق واسع كنموذج قابل للتكرار لدراسة إشارات المناعة الفطرية والالتهاب. تظل خلايا الدم البشرية الأولية ذات أهمية بيولوجية، لكنها تُظهر تباينًا بين المتبرعين ولها عمر افتراضي محدود خارج الجسم الحي؛ يمكن لخلايا THP-1 أن تُكمّل تجارب الخلايا الأولية، ولكن لا ينبغي أن تحل محلها تلقائيًا.

في هذا المثال، تم استزراع خلايا THP-1 في وسط RPMI-1640 مع 10% من مصل الأبقار الجنيني. أُضيف LPS بتركيزات نهائية قدرها 50 نانوغرام/مل و500 نانوغرام/مل.

تم جمع السوائل الطافية للمزارع بعد 24 و 48 ساعة ثم تم اختبارها للكشف عن IL-23 البشري.

لا ينبغي تصنيف تركيزي LPS تلقائيًا على أنهما "متوسط" و"قوي". تعتمد استجابة THP-1 لـ LPS على حالة الخلية، وحالة التمايز، وكثافة الخلية، وظروف المصل، والتعبير عن المستقبلات؛ ولا يؤدي ارتفاع تركيز LPS بالضرورة إلى استجابة IL-23 أعلى بشكل متناسب أو أكثر قابلية للتفسير.

لا ينبغي التعامل مع نتائج THP-1 كما يتم التعامل مع نتائج الخلايا الأولية

لا تشترك خلايا THP-1 والخلايا الوحيدة البشرية الأولية أو الخلايا الليمفاوية المحيطية في نفس الأصل أو السلوك البيولوجي. وقد يختلف تعبير مستقبلاتها، وحالة تنشيطها، ونمط نموها، واستجابتها للليبوساكاريد (LPS).

ينبغي تفسير نتائج خلايا THP-1 أولاً في ضوء نموذج THP-1، ولا ينبغي استخدامها كبديل مباشر لبيانات خلايا المناعة البشرية الأولية.

عندما تكون إشارة التحليل ضعيفة، أو يبدو منحنى المعايرة غير عادي، أو لا تتفق نتائج التشغيلات المتكررة، فإن Solarbio فريق الدعم الفني يمكن أن يساعد في مراجعة اختيار المنتج وشروط الاختبار الأساسية.

هل تُعد خلايا جركات نموذجًا مناسبًا لإفراز إنترلوكين-23؟

يتطلب تحفيز PMA تفسيراً حذراً

خلايا جركات هي سلالة من خلايا سرطان الدم الليمفاوي التائي البشري تُستخدم على نطاق واسع في دراسات إشارات الخلايا التائية. ومع ذلك، فإن الخلايا الوحيدة المنشطة، والبلعميات، والخلايا المتغصنة هي المصادر الخلوية الرئيسية المعروفة لإنترلوكين-23 غير المتجانس المفرز، لذا فإن خلايا جركات ليست نموذجًا قياسيًا لإنتاج إنترلوكين-23.

في التجربة الموضحة هنا، استُخدم PMA بتركيزين نهائيين هما 0.2 ميكروغرام/مل و10 ميكروغرام/مل لمدة ثلاثة أو خمسة أيام قبل جمع السائل الطافي. تُعدّ هذه ظروف تحفيز قوية ومطولة لخلايا جركات، ولا ينبغي اعتبارها ظروفًا مُوصى بها عمومًا لتحفيز إنتاج IL-23. يجب تفسير أي إشارة IL-23 يتم الحصول عليها في ظل هذه الظروف جنبًا إلى جنب مع بيانات الضوابط غير المُحفزة وبيانات حيوية الخلايا.

إن نطاق التركيز الكبير والتعرض لعدة أيام يجعل تفسير استجابة الجرعة أمرًا صعبًا، لأن التغيرات في الحيوية والتكاثر وحالة الخلية قد تهيمن على النتيجة المقاسة.

ينبغي مراقبة حيوية الخلايا وعددها طوال فترة التجربة، لا سيما عند التركيز العالي لـ PMA وبعد التعرض المطول. لا يُعدّ وجود إشارة قابلة للكشف في اختبار ELISA دليلاً كافياً على أن خلايا Jurkat نموذج مناسب فسيولوجيًا لإنتاج IL-23؛ لذا يجب تأكيد النتائج الإيجابية غير المتوقعة باستخدام ضوابط مناسبة، وعند الضرورة، باستخدام طريقة مستقلة.

يجب أن يتطابق المحفز ونوع الخلية مع هدف الدراسة.

لا يُعدّ كلٌّ من LPS وPMA منبهات قابلة للتبادل. يُنشّط LPS الإشارات المعتمدة على TLR4 في خلايا المناعة الفطرية المستجيبة، بينما يُنشّط PMA بشكل مباشر المسارات المعتمدة على بروتين كيناز C، ويُستخدم عادةً لتحفيز الإشارات في العديد من نماذج الخلايا.

ينبغي أن يحدد الغرض من التجربة نموذج الخلية والمحفز. يمكن استخدام خلايا THP-1 أو خلايا السلالة الوحيدة الأولية لدراسة الاستجابات المناعية الفطرية لـ LPS. قد تكون خلايا Jurkat المعالجة بـ PMA مفيدة لدراسات إشارات الخلايا التائية، لكن هذا لا يجعلها نموذجًا معتمدًا لإفراز IL-23. يجب تفسير نتيجة اختبار ELISA في ضوء بيولوجيا النموذج المختار.

تنشر شركة سولاربيو مقالات المختبر وتحديثات المنتجات والتي تغطي الكشف باستخدام تقنية ELISA، والتجارب الخلوية، ومشاكل الاختبار الشائعة.

لماذا لا يمكن الكشف عن IL-23 في مصل الدم والبلازما الطبيعية؟

قد تكون النتائج أقل من حد الكشف

في هذه العينة، تم اختبار 20 عينة من بلازما بشرية طبيعية و20 عينة من مصل بشري طبيعي، وكان مستوى IL-23 أقل من الحد الأدنى للكشف في جميع العينات.

لا تثبت هذه النتيجة غياب IL-23 تمامًا، بل تعني أنه في ظل ظروف التحليل المستخدمة، كان أي تركيز موجود من IL-23 أقل من قدرة الكشف المحددة للتحليل.

قد تتواجد العديد من السيتوكينات، بما في ذلك إنترلوكين-23، بتراكيز منخفضة للغاية في دم الأفراد الأصحاء. كما يمكن أن تتأثر التراكيز المقاسة بالحالة المناعية، والالتهاب أو العدوى، والأدوية، والعمر، وطريقة التعامل مع العينات، وعوامل بيولوجية أو ما قبل التحليلية أخرى.

لا يُعدّ الحصول على نتيجة أقل من حد الكشف دليلاً قاطعاً على فشل التحليل. ينبغي مراجعة منحنى المعايرة، وأداء العينة الفارغة وعينة التحكم، ومعالجة العينة، وإجراءات التحليل أولاً. إذا كان أداء التحليل مقبولاً، فينبغي الإبلاغ عن النتيجة على أنها أقل من حد الكشف، أو وفقاً لاتفاقية الإبلاغ المحددة من قبل الشركة المصنعة، بدلاً من تحديد تركيز دقيق.

المصل والبلازما مادتان مختلفتان

لا ينبغي دمج المصل والبلازما تلقائيًا في مجموعة تحليلية واحدة. تختلف طرق تحضيرهما، ويمكن أن تؤثر تأثيرات المصفوفة على أداء التحليل.

يجب توثيق أنبوب التجميع، ومضاد التخثر المستخدم للبلازما، وظروف التخثر للمصل، ووقت الطرد المركزي، ودرجة حرارة التخزين، وعدد دورات التجميد والذوبان. وتكتسب هذه المتغيرات أهمية خاصة عندما يكون التركيز المستهدف قريبًا من الحد الأدنى لنطاق القياس القابل للإبلاغ.

أي مجموعة اختبار ELISA لـ IL-23 تناسب العينة؟

مجموعة اختبار ELISA للإنترلوكين-23 البشري

إن SEKH-0034 مجموعة إليسا البشرية IL-23 يمكن استخدامه للكشف الكمي عن IL-23 البشري في أنواع العينات البشرية المعتمدة، بما في ذلك المصل والبلازما وسوائل زراعة الخلايا، وفقًا لتعليمات المنتج الحالية.

يُعد هذا المنتج ذا صلة بأبحاث الالتهابات، والدراسات المتعلقة بالخلايا التائية المساعدة 17، وتحفيز الخلايا المناعية، وآليات المناعة الذاتية، والعدوى، ومناعة الأورام.

يجب استخدام مجموعة SEKH-0034 Human IL-23 ELISA مع مصفوفات العينات المعتمدة في تعليمات المنتج الحالية. قبل الاختبار، يجب مراعاة التركيز المتوقع لضمان أن تقع العينات ضمن النطاق القابل للإبلاغ في الاختبار، أو إمكانية تعديلها لتتوافق معه، باستخدام إجراء تخفيف معتمد.

مجموعات IL-23 لأنواع أخرى

SEKM-0024 ماوس IL-23 ELISA Kit مخصص لعينات الفئران. مجموعة SEKR-0072 لاختبار IL-23 للفئران بتقنية ELISA يُستخدم لعينات الفئران، و مجموعة اختبار ELISA لإنترلوكين-23 الدجاج SEKCN-0130 وهو متاح لأبحاث الدجاج.

لا يجوز استخدام مجموعة أدوات مصممة لنوع معين من الكائنات الحية مع نوع آخر إلا بعد اختبار التفاعل المتبادل والتأكد منه. ولا يعني تشابه أسماء البروتينات أن الأجسام المضادة المستخدمة في الفحص ستتعرف على الهدف بنفس الطريقة.

ينبغي اختيار مجموعة اختبار ELISA للفأر IL-23 وغيرها من المجموعات الخاصة بالأنواع وفقًا للنموذج الحيواني المستخدم في الدراسة.

تأسست شركة بكين سولاربيو للعلوم والتكنولوجيا المحدودة عام 2004، وهي تُطوّر منتجات في مجالات علم المناعة، وعلم الأحياء الخلوي، وعلم الأحياء الجزيئي، والكيمياء الحيوية. للمزيد من المعلومات حول منتجاتها ونظام الجودة الخاص بها، يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني. صفحة شركة سولاربيو.

ما الذي يجب التحقق منه قبل قراءة النتيجة النهائية؟

ابدأ بالمنحنى القياسي

يجب أن يستوفي منحنى المعايرة معايير القبول المحددة في المجموعة وأن يستخدم أسلوب مطابقة المنحنى الموصى به. يجب أن تتوافق نتائج الآبار المكررة ضمن حدود الدقة المحددة للاختبار.

ينبغي أن تبقى قيمة الامتصاص في العينة الفارغة منخفضة. قد تشير القيمة العالية في العينة الفارغة إلى عدم اكتمال الغسل، أو التلوث، أو سوء التعامل مع الكواشف، أو زيادة مدة الحضانة.

يجب تخفيف العينات التي تتجاوز إشاراتها الحد الأعلى المسموح به في التحليل وإعادة اختبارها إذا سمح البروتوكول بذلك. لا تُسجّل النتائج التي تقل عن الحد الأدنى للقياس الكمي كتركيزات دقيقة، بينما تُسجّل النتائج التي تقل عن حد الكشف وفقًا لذلك.

ألق نظرة على تحضير العينة

غالباً ما تدفع قيم IL-23 غير المتوقعة المحققين إلى التشكيك في المجموعة أولاً، ولكن قد يكون مصدر التناقض قد حدث في وقت سابق من سير العمل.

قد يختلف تركيز الخلايا بين المجموعات، أو ربما تم تحضير المحفز بشكل غير صحيح، أو قد يحتوي السائل الطافي على بقايا خلايا. كما قد تكون عينات المصل أو البلازما قد خضعت لدورات متكررة من التجميد والذوبان.

يجب أن تكون عمليات المعايرة والغسل ووقت ودرجة حرارة الحضانة وإعدادات قارئ الألواح الدقيقة متسقة. يُعد اختبار ELISA حساسًا لاختلافات التعامل، خاصةً عندما يكون تركيز السيتوكين منخفضًا.

استنتاج

يمكن أن يوفر قياس IL-23 البشري معلومات مفيدة في دراسات الالتهاب والاستجابة المناعية، ولكن يجب تفسير التركيز المقاس في سياق التصميم التجريبي الكامل.

في دراسات تحفيز إنتاج الإنترلوكين-23 بواسطة الليبوبوليسكاريد (LPS)، تُعدّ الخلايا الليمفاوية المحيطية أحادية النواة (PBMCs) المحتوية على الخلايا الوحيدة، أو الخلايا الوحيدة الأولية، أو الخلايا المتغصنة، ونماذج الخلايا النخاعية الموصوفة بدقة، أكثر ملاءمةً من الناحية البيولوجية من الخلايا الليمفاوية النقية. يمكن تقييم خلايا THP-1 باستخدام الليبوبوليسكاريد (LPS) في ظل ظروف زراعة مُثبتة. قد تكون خلايا جركات مفيدةً لدراسات إشارات الخلايا التائية المُحفزة بواسطة PMA، ولكن لا ينبغي تقديمها كنموذج قياسي لإفراز الإنترلوكين-23 دون توثيق داعم.

قد تُظهر عينات المصل والبلازما الطبيعية مستويات إنترلوكين-23 أقل من الحد الأدنى للكشف. ويمكن أن تكون هذه النتيجة صحيحة عندما تعمل ضوابط الفحص ومنحنى المعايرة بشكل طبيعي.

تؤثر عوامل مثل مطابقة الأنواع، ومعالجة العينات، واتساق الاستزراع، وتنفيذ التحليل، على البيانات النهائية. وللاستفسار عن اختيار الأدوات أو شروط الاختبار، يمكن للباحثين التواصل مع شركة Solarbio قبل بدء التحليل.

أسئلة متكررة

س1: ما هو IL-23 البشري؟

أ1: يُعدّ الإنترلوكين-23 البشري سيتوكينًا ثنائي الوحدات غير متجانس مُحفّزًا للالتهاب، وينتمي إلى عائلة الإنترلوكين-12. ويتكون من الوحدة الفرعية p19 المشفرة بواسطة جين IL-23A والوحدة الفرعية p40 المشفرة بواسطة جين IL-12B.

س2: لماذا يرتبط IL-23 بخلايا Th17؟

A2: يقوم IL-23 بإرسال الإشارات من خلال مركب مستقبل يتكون من IL-23R و IL-12Rβ1. وهذا ينشط الإشارات المرتبطة بـ JAK2/TYK2، مع كون STAT3 هو STAT السائد في الاستجابات المتعلقة بـ Th17.

س3: هل يمكن الكشف عن إنترلوكين-23 البشري في السوائل الطافية لمزارع الخلايا؟

ج٣: نعم. يمكن اختبار السوائل الطافية لمزارع الخلايا عندما يكون نموذج الخلية قادرًا على إنتاج إنترلوكين-٢٣، ويكون نوع العينة معتمدًا لمجموعة اختبار ELISA. تُعد الخلايا الليمفاوية المحيطية أحادية النواة المحتوية على الخلايا الوحيدة، والخلايا الوحيدة/البلعمية/المتغصنة الأولية، ونماذج الخلايا النخاعية الموصوفة بشكل مناسب، أكثر ملاءمةً لدراسات إفراز إنترلوكين-٢٣ من الخلايا الليمفاوية النقية أو خلايا جركات.

س4: هل يمكن استخدام LPS في تجربة IL-23؟

ج٤: نعم. يمكن أن يحفز الليبوبوليسكاريد (LPS) إنتاج الإنترلوكين-٢٣ (IL-23) في خلايا المناعة الفطرية المستجيبة، بما في ذلك الخلايا الوحيدة، والبلعميات، والخلايا المتغصنة، ومستحضرات الخلايا الليمفاوية المحيطية أحادية النواة (PBMC) المحتوية على الخلايا الوحيدة، وبعض نماذج الخلايا النخاعية. ولا ينبغي افتراض أنه يحفز إفراز الإنترلوكين-٢٣ من الخلايا الليمفاوية النقية.

س5: هل يمكن استخدام PMA مع خلايا جركات؟

ج٥: يمكن لـ PMA تنشيط خلايا جركات وهو مفيد في دراسات إشارات الخلايا التائية، لكن خلايا جركات ليست نموذجًا قياسيًا لإنتاج IL-23 المفرز. لا ينبغي تقديم مستخلصات خلايا جركات المعالجة بـ PMA كعنصر تحكم إيجابي معتمد لـ IL-23 دون بيانات داعمة.

س6: لماذا يكون IL-23 غير قابل للكشف أحيانًا في المصل أو البلازما الطبيعية؟

ج6: قد يتواجد إنترلوكين-23 بتركيز أقل من الحد الأدنى للكشف في التحليل. وهذا أمر شائع مع السيتوكينات منخفضة الوفرة في العينات الطبيعية.

س7: هل يمكن لمجموعة اختبار ELISA الخاصة بـ IL-23 للفأر اختبار العينات البشرية؟

ج7: لا. يجب اختبار العينات البشرية باستخدام مجموعة اختبار ELISA البشرية IL-23 ما لم يقم المصنع بالتحقق من صحة التفاعل المتبادل بشكل خاص.

س8: ما الذي يجب فحصه عندما لا تتطابق الآبار المكررة؟

A8: ينبغي مراجعة دقة استخدام الماصة، وخلط العينات، والغسل، ووقت الحضانة، وموضع اللوحة، والفقاعات، وإعداد الكواشف.