การตรวจหา IL-23 ของมนุษย์ด้วยวิธี ELISA ในสารละลายจากการเพาะเลี้ยงเซลล์ เซรั่ม และพลาสมา

IL-23 เป็นไซโตไคน์ที่มักถูกวัดในงานวิจัยเกี่ยวกับการอักเสบ ชีววิทยาของเซลล์ Th17 การกระตุ้นภูมิคุ้มกัน โรคภูมิต้านตนเอง การติดเชื้อ และภูมิคุ้มกันต่อเนื้องอก เนื่องจาก IL-23 เป็นส่วนประกอบสำคัญของแกน IL-23/IL-17 จึงมักถูกประเมินร่วมกับสารสื่อกลางที่เกี่ยวข้อง เช่น IL-17A, IL-22 และ GM-CSF นอกจากนี้ อาจมีการวิเคราะห์ตัวบ่งชี้เส้นทางอื่นๆ เพิ่มเติม ขึ้นอยู่กับคำถามทางชีววิทยาที่ต้องการศึกษา

ขั้นตอนการทดสอบ ELISA นั้นไม่ซับซ้อนนัก แต่ตัวแปรทางด้านก่อนการวิเคราะห์และทางชีวภาพสามารถส่งผลต่อผลลัพธ์ได้อย่างมาก ชนิดของเซลล์ สภาวะการกระตุ้น ระยะเวลาการเพาะเลี้ยง การจัดการและการเก็บรักษาตัวอย่าง และความเข้มข้นของ IL-23 ที่คาดหวัง ล้วนส่งผลต่อค่าที่วัดได้ ในซีรั่มหรือพลาสมาของผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี IL-23 อาจมีความเข้มข้นต่ำกว่าความสามารถในการตรวจวัดของชุดทดสอบ ในขณะที่การเพาะเลี้ยงเซลล์ที่สร้าง IL-23 ซึ่งได้รับการกระตุ้นอย่างเหมาะสม อาจให้ความเข้มข้นที่วัดได้ง่าย

ตัวอย่างต่อไปนี้เกี่ยวข้องกับการเตรียมเซลล์เม็ดเลือดจากส่วนปลาย เซลล์ THP-1 เซลล์ Jurkat เซรั่ม และพลาสมา นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นถึงประเด็นสำคัญประการหนึ่งคือ ความเหมาะสมของแต่ละแบบจำลองสำหรับการวัด IL-23 นั้นไม่เท่ากัน และผลลัพธ์จะต้องได้รับการตีความในบริบทของชนิดเซลล์และสภาวะการกระตุ้นด้วย

IL-23 ของมนุษย์คืออะไร?

IL-23 ประกอบด้วยหน่วยย่อยที่แตกต่างกันสองหน่วย

IL-23 ของมนุษย์อยู่ในกลุ่มไซโตไคน์ตระกูล IL-12 โดยเป็นเฮเทอโรไดเมอร์ ไม่ใช่โปรตีนสายเดี่ยว

IL-23 ประกอบด้วยหน่วยย่อย p19 ที่เข้ารหัสโดยยีน IL23A และหน่วยย่อย p40 ที่เข้ารหัสโดยยีน IL12B สารตั้งต้น p19 ของมนุษย์มีความยาว 189 กรดอะมิโน หน่วยย่อย p40 มีร่วมกับ IL-12 และ p19 กับ p40 จะรวมตัวกันเป็นเฮเทอโรไดเมอร์ที่เชื่อมต่อกันด้วยพันธะไดซัลไฟด์เพื่อสร้าง IL-23 ที่มีฤทธิ์ทางชีวภาพ

โครงสร้างนี้มีความสำคัญต่อการตรวจจับ การทดสอบที่ออกแบบมาเพื่อวัด IL-23 ที่สมบูรณ์ ควรแยกแยะเฮเทอโรไดเมอร์ p19/p40 ออกจากโปรตีนในกลุ่ม IL-12 ที่เกี่ยวข้อง และหน่วยย่อยที่แยกออกมาตามความจำเพาะที่ได้รับการตรวจสอบแล้วของการทดสอบ ดังนั้น ควรยืนยันความจำเพาะของสายพันธุ์และเป้าหมายก่อนทำการทดสอบ

Solarbio เป็นผู้จัดจำหน่ายผลิตภัณฑ์ตรวจจับไซโตไคน์และผลิตภัณฑ์อื่นๆ โซลูชันการวิจัยภูมิคุ้มกันวิทยา สำหรับการศึกษาที่ใช้เซลล์และตัวอย่างเป็นฐาน

IL-23 ช่วยรักษาสภาวะการตอบสนองของ Th17

IL-23 ส่งสัญญาณผ่านตัวรับแบบเฮเทอโรไดเมอริกที่ประกอบด้วย IL-23R และ IL-12Rβ1 ตัวรับนี้แสดงออกบนประชากรเซลล์ภูมิคุ้มกันที่ตอบสนองหลายกลุ่ม รวมถึงเซลล์ T CD4+ ที่ถูกกระตุ้นและเซลล์ T CD4+ หน่วยความจำ

การกระตุ้นตัวรับ IL-23 จะกระตุ้นการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับ JAK2/TYK2 และ STAT3 เป็นหลัก โดยมี STAT4 มีส่วนร่วมในระดับที่น้อยกว่าในบริบทของเซลล์หลายๆ เซลล์ การส่งสัญญาณนี้สนับสนุนโปรแกรมการทำงานของ Th17 ซึ่งรวมถึงการแสดงออกของ RORγt และการผลิต IL-17A, IL-22 และ GM-CSF

IL-23 มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการคงอยู่ การขยายตัว และการทำงานของเซลล์ Th17 ในการก่อโรค มากกว่าที่จะทำหน้าที่เป็นตัวเริ่มต้นเพียงอย่างเดียวในการสร้างความแตกต่างของเซลล์ T ที่ยังไม่ได้รับการกระตุ้น นี่คือเหตุผลที่มักมีการวัดระดับ IL-23 ในการศึกษาเกี่ยวกับการอักเสบเรื้อรัง กลไกของโรคภูมิต้านตนเอง การติดเชื้อ และภูมิคุ้มกันต่อเนื้องอก

นักวิจัยที่ศึกษาเครือข่ายในวงกว้างสามารถใช้ Solarbio ได้ ส่วนเส้นทางการส่งสัญญาณ เพื่อค้นหาเป้าหมายและผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้อง

ควรประเมินระดับ IL-23 ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เม็ดเลือดจากหลอดเลือดส่วนปลายอย่างไร?

การกระตุ้นด้วย LPS จำเป็นต้องมีการเตรียมเซลล์ที่เหมาะสม

สำหรับการทดลองกระตุ้นการสร้าง IL-23 ด้วย LPS นั้น เซลล์เม็ดเลือดขาวชนิดโมโนนิวคลีอาร์จากเลือดส่วนปลายของมนุษย์ (PBMCs) หรือสารเตรียมอื่นๆ ที่มีโมโนไซต์หรือเซลล์นำเสนอแอนติเจนอื่นๆ จะเหมาะสมกว่าลิมโฟไซต์จากเลือดส่วนปลายที่บริสุทธิ์ IL-23 ผลิตขึ้นโดยส่วนใหญ่จากโมโนไซต์ แมโครฟาจ และเซลล์เดนดริติกที่ถูกกระตุ้น และการตอบสนองต่อ LPS ในสารเตรียมเซลล์เม็ดเลือดของมนุษย์ส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับกลไกการรับรู้ LPS โดยกำเนิด หากบันทึกวัสดุเริ่มต้นว่าเป็น “ลิมโฟไซต์จากเลือดส่วนปลาย” ควรตรวจสอบวิธีการแยกและปริมาณโมโนไซต์ก่อนตีความผลลัพธ์

ในการจัดเตรียมการทดสอบที่อธิบายไว้ในที่นี้ เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 หรือ 96 ชั่วโมง และเก็บสารละลายส่วนบนของเซลล์เพื่อวัดปริมาณ IL-23 ของมนุษย์ หากใช้ความเข้มข้นของ LPS ที่ 50 ng/mL และ 1 μg/mL ควรพิจารณาว่าเป็นเงื่อนไขการทดลองเฉพาะของการศึกษา ไม่ใช่ปริมาณที่แนะนำโดยทั่วไป

ด้วยความเข้มข้นของ LPS สองระดับและช่วงเวลาเก็บตัวอย่างสองช่วง การออกแบบนี้จึงให้สภาวะกระตุ้นสี่แบบ ควรทำการเปรียบเทียบ ณ จุดเวลาที่ตรงกัน และควรมีกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการกระตุ้นสำหรับแต่ละจุดเวลาด้วย

ผลการวิจัยไม่ควรตีความว่าเป็นเพียงการเปรียบเทียบระหว่างปริมาณยาที่สูงกว่ากับปริมาณยาที่ต่ำกว่าเท่านั้น ในระหว่างการเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นเวลา 96 ชั่วโมง การขาดสารอาหาร การเปลี่ยนแปลงความหนาแน่นของเซลล์ การตายของเซลล์ การเปลี่ยนแปลงองค์ประกอบของเซลล์ และการย่อยสลายหรือการบริโภคของไซโตไคน์ ล้วนสามารถเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นที่วัดได้ในสารละลายส่วนบนได้

ควรมีการควบคุมโดยไม่ได้รับการกระตุ้นภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงที่เหมือนกันทุกประการในแต่ละช่วงเวลา หากไม่มีการควบคุมนี้ จะไม่สามารถแยกแยะการหลั่งที่เกิดจากการกระตุ้นด้วย LPS ออกจากการหลั่งพื้นฐานหรือการเปลี่ยนแปลงตามเวลาในวัฒนธรรมได้อย่างน่าเชื่อถือ

รายละเอียดด้านวัฒนธรรมต้องคงที่สม่ำเสมอ

การเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในการจัดการเพาะเลี้ยงเซลล์อาจส่งผลให้การวัดระดับไซโตไคน์มีความแตกต่างกันอย่างมาก ความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้น เปอร์เซ็นต์ของซีรัม ปริมาตรการเพาะเลี้ยงทั้งหมด การเตรียม LPS สภาวะการบ่ม และวิธีการเก็บตัวอย่าง ควรมีความสม่ำเสมอในทุกกลุ่ม สำหรับการทดลองกับเซลล์เม็ดเลือดปฐมภูมิ ควรบันทึกแหล่งที่มาของผู้บริจาคและวิธีการแยกเซลล์ด้วย เนื่องจากความแตกต่างในปริมาณโมโนไซต์อาจส่งผลกระทบอย่างมากต่อ IL-23 ที่เกิดจากการกระตุ้นด้วย LPS

ของเหลวส่วนบนทั้งหมดควรได้รับการประมวลผลอย่างสม่ำเสมอหลังจากเก็บตัวอย่างแล้ว หลีกเลี่ยงการเปรียบเทียบตัวอย่างสดกับตัวอย่างที่ผ่านการแช่แข็งและละลายซ้ำหลายครั้ง

โซลาร์ไบโอ กลุ่มผลิตภัณฑ์วิจัย ครอบคลุมถึงชุดตรวจ ELISA, สารเคมีสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์, สารกระตุ้น และผลิตภัณฑ์อื่นๆ ที่ใช้ในการทดลองเกี่ยวกับเซลล์ภูมิคุ้มกัน

การตรวจจับ IL-23 ในเซลล์ THP-1 ทำงานอย่างไร?

แบบจำลองเซลล์โมโนไซต์ที่ได้รับการกระตุ้นด้วย LPS

เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดโมโนไซต์ของมนุษย์สายพันธุ์ THP-1 ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในฐานะแบบจำลองที่สามารถสร้างผลลัพธ์ซ้ำได้สำหรับการศึกษาการส่งสัญญาณภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดและการอักเสบ เซลล์เม็ดเลือดของมนุษย์ปฐมภูมิยังคงมีความสำคัญทางชีววิทยา แต่แสดงความแปรปรวนระหว่างผู้บริจาคแต่ละรายและมีอายุการใช้งานนอกร่างกายที่จำกัด เซลล์ THP-1 สามารถใช้เสริมได้ แต่ไม่ควรใช้แทนการทดลองกับเซลล์ปฐมภูมิโดยอัตโนมัติ

ในตัวอย่างนี้ เซลล์ THP-1 ถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ RPMI-1640 ที่มีซีรั่มจากลูกวัว 10% โดยเติม LPS ในความเข้มข้นสุดท้ายที่ 50 ng/mL และ 500 ng/mL

เก็บตัวอย่างสารละลายที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเซลล์หลังจาก 24 และ 48 ชั่วโมง จากนั้นจึงนำไปทดสอบหาปริมาณ IL-23 ของมนุษย์

ไม่ควรจัดระดับความเข้มข้นของ LPS ทั้งสองระดับเป็น “ปานกลาง” และ “แรง” โดยอัตโนมัติ การตอบสนองของ THP-1 ต่อ LPS ขึ้นอยู่กับสภาวะของเซลล์ สถานะการแบ่งตัว ความหนาแน่นของเซลล์ สภาวะของซีรัม และการแสดงออกของตัวรับ ความเข้มข้นของ LPS ที่สูงขึ้นไม่ได้หมายความว่าจะทำให้เกิดการตอบสนองของ IL-23 ที่สูงขึ้นหรือตีความได้ง่ายขึ้นเสมอไป

ผลลัพธ์จาก THP-1 ไม่ควรถูกนำไปใช้เหมือนกับผลลัพธ์จากเซลล์ปฐมภูมิ

เซลล์ THP-1 และโมโนไซต์ของมนุษย์ (PBMCs) ไม่ได้มีต้นกำเนิดหรือพฤติกรรมทางชีวภาพเหมือนกัน การแสดงออกของตัวรับ สถานะการกระตุ้น รูปแบบการเจริญเติบโต และการตอบสนองต่อ LPS อาจแตกต่างกันได้

ผลลัพธ์ที่ได้จากเซลล์ THP-1 ควรได้รับการตีความภายในแบบจำลอง THP-1 ก่อน ไม่ควรนำไปใช้แทนข้อมูลจากเซลล์ภูมิคุ้มกันของมนุษย์โดยตรง

เมื่อสัญญาณการทดสอบอ่อน เส้นกราฟมาตรฐานดูผิดปกติ หรือผลการทดสอบซ้ำไม่สอดคล้องกัน Solarbio จะช่วยคุณได้ ทีมบริการด้านเทคนิค สามารถช่วยตรวจสอบการเลือกผลิตภัณฑ์และเงื่อนไขการทดสอบพื้นฐานได้

เซลล์ Jurkat เหมาะสมที่จะใช้เป็นแบบจำลองสำหรับการหลั่ง IL-23 หรือไม่?

การกระตุ้นด้วย PMA จำเป็นต้องตีความอย่างระมัดระวัง

เซลล์ Jurkat เป็นเซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดทีเซลล์ของมนุษย์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาการส่งสัญญาณของทีเซลล์ อย่างไรก็ตาม เซลล์โมโนไซต์ที่ถูกกระตุ้น เซลล์แมโครฟาจ และเซลล์เดนดริติก เป็นแหล่งเซลล์หลักที่ได้รับการยืนยันแล้วว่าสามารถหลั่ง IL-23 แบบเฮเทอโรไดเมอร์ได้ ดังนั้นเซลล์ Jurkat จึงไม่ใช่แบบจำลองมาตรฐานสำหรับการผลิต IL-23 ในเชิงบวก

ในการทดลองที่อธิบายไว้ในที่นี้ ใช้ PMA ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 0.2 μg/mL และ 10 μg/mL เป็นเวลาสามหรือห้าวันก่อนเก็บสารละลายส่วนบน สภาวะการกระตุ้นเหล่านี้รุนแรงและยาวนานสำหรับเซลล์ Jurkat และไม่ควรนำเสนอเป็นสภาวะที่แนะนำโดยทั่วไปสำหรับการเหนี่ยวนำ IL-23 สัญญาณ IL-23 ใดๆ ที่ได้รับภายใต้สภาวะเหล่านี้ ควรตีความร่วมกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับการกระตุ้นและข้อมูลความมีชีวิตของเซลล์

ช่วงความเข้มข้นที่กว้างและระยะเวลาการสัมผัสหลายวันทำให้การตีความความสัมพันธ์ระหว่างปริมาณยาและการตอบสนองอย่างง่ายทำได้ยาก เนื่องจากความเปลี่ยนแปลงในความมีชีวิต การแพร่กระจาย และสภาวะของเซลล์อาจมีอิทธิพลเหนือผลลัพธ์ที่วัดได้

ควรติดตามความมีชีวิตของเซลล์และจำนวนเซลล์ตลอดการทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นของ PMA ที่สูงขึ้นและหลังจากการสัมผัสเป็นเวลานาน สัญญาณ ELISA ที่ตรวจพบได้เพียงอย่างเดียวไม่ได้ยืนยันว่าเซลล์ Jurkat เป็นแบบจำลองการผลิต IL-23 ที่เหมาะสมทางสรีรวิทยา ผลลัพธ์ที่เป็นบวกที่ไม่คาดคิดควรได้รับการยืนยันด้วยตัวควบคุมที่เหมาะสม และเมื่อจำเป็น ควรใช้วิธีการอื่นร่วมด้วย

สารกระตุ้นและชนิดของเซลล์ต้องสอดคล้องกับเป้าหมายของการศึกษา

LPS และ PMA ไม่ใช่สารกระตุ้นที่ใช้แทนกันได้ LPS กระตุ้นการส่งสัญญาณที่ขึ้นอยู่กับ TLR4 ในเซลล์ภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดที่ตอบสนอง ในขณะที่ PMA กระตุ้นเส้นทางที่ขึ้นอยู่กับโปรตีนไคเนส C โดยตรง และมักใช้เพื่อกระตุ้นการส่งสัญญาณในแบบจำลองเซลล์หลายชนิด

วัตถุประสงค์ของการทดลองควรกำหนดแบบจำลองเซลล์และสิ่งกระตุ้น เซลล์ THP-1 หรือเซลล์ต้นกำเนิดโมโนไซต์อาจใช้ในการศึกษาการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดต่อ LPS เซลล์ Jurkat ที่มี PMA อาจมีประโยชน์สำหรับการศึกษาการส่งสัญญาณของเซลล์ T แต่สิ่งนี้ไม่ได้ทำให้เซลล์ Jurkat เป็นแบบจำลองที่ได้รับการรับรองสำหรับการหลั่ง IL-23 ผลลัพธ์ของ ELISA ต้องได้รับการตีความภายในขอบเขตทางชีววิทยาของแบบจำลองที่เลือก

Solarbio เผยแพร่ บทความเกี่ยวกับห้องปฏิบัติการและการอัปเดตผลิตภัณฑ์ ซึ่งครอบคลุมถึงการตรวจจับด้วยวิธี ELISA การทดลองกับเซลล์ และประเด็นการทดสอบทั่วไป

เหตุใดซีรั่มและพลาสมาปกติจึงตรวจไม่พบ IL-23?

ผลลัพธ์อาจต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับ

ในการทดสอบตัวอย่างชุดนี้ ได้ทำการทดสอบตัวอย่างพลาสมาของมนุษย์ปกติ 20 ตัวอย่าง และตัวอย่างซีรั่มของมนุษย์ปกติ 20 ตัวอย่าง และพบว่าระดับ IL-23 ต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับของชุดทดสอบในทุกตัวอย่าง

ผลการค้นพบนี้ไม่ได้พิสูจน์ว่า IL-23 หายไปโดยสิ้นเชิง แต่หมายความว่า ภายใต้สภาวะการทดสอบที่ใช้ ปริมาณ IL-23 ที่มีอยู่จะต่ำกว่าความสามารถในการตรวจจับที่ระบุไว้ของการทดสอบนั้น

ไซโตไคน์หลายชนิด รวมถึง IL-23 อาจหมุนเวียนอยู่ในกระแสเลือดในบุคคลที่มีสุขภาพดีในระดับความเข้มข้นต่ำมาก ความเข้มข้นที่วัดได้ยังอาจได้รับอิทธิพลจากสถานะภูมิคุ้มกัน การอักเสบหรือการติดเชื้อ ยา อายุ การจัดการตัวอย่าง และปัจจัยทางชีวภาพหรือปัจจัยก่อนการวิเคราะห์อื่นๆ ด้วย

ผลลัพธ์ที่ต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจวัดไม่ได้หมายความว่าการทดสอบล้มเหลวเสมอไป ควรตรวจสอบเส้นกราฟการสอบเทียบ ประสิทธิภาพของตัวอย่างว่างและตัวควบคุม การจัดการตัวอย่าง และขั้นตอนการทดสอบก่อน หากประสิทธิภาพการทดสอบเป็นที่ยอมรับได้ ควรรายงานผลลัพธ์ว่าต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจวัด หรือตามหลักเกณฑ์การรายงานที่ผู้ผลิตกำหนด แทนที่จะระบุความเข้มข้นที่แน่นอน

ซีรั่มและพลาสมาเป็นเมทริกซ์ที่แตกต่างกัน

ไม่ควรนำซีรัมและพลาสมามารวมไว้ในกลุ่มวิเคราะห์เดียวกันโดยอัตโนมัติ เนื่องจากวิธีการเตรียมตัวอย่างแตกต่างกัน และผลกระทบจากเมทริกซ์อาจส่งผลต่อประสิทธิภาพการวิเคราะห์

ควรบันทึกรายละเอียดของหลอดเก็บตัวอย่าง สารกันเลือดแข็งที่ใช้สำหรับพลาสมา สภาวะการแข็งตัวของเลือดสำหรับซีรั่ม ระยะเวลาในการปั่นแยก อุณหภูมิในการจัดเก็บ และจำนวนรอบการแช่แข็งและละลาย ตัวแปรเหล่านี้มีความสำคัญเป็นพิเศษเมื่อความเข้มข้นเป้าหมายอยู่ใกล้กับค่าต่ำสุดของช่วงที่สามารถรายงานได้ของการทดสอบ

ชุดตรวจ IL-23 ELISA ชุดไหนเหมาะกับตัวอย่างนี้?

ชุดตรวจ ELISA สำหรับ IL-23 ของมนุษย์

ที่ SEKH-0034 ชุดตรวจ ELISA IL-23 สำหรับมนุษย์ สามารถใช้สำหรับการตรวจวัดปริมาณ IL-23 ของมนุษย์ในตัวอย่างมนุษย์ที่ได้รับการตรวจสอบแล้ว เช่น ซีรัม พลาสมา และสารละลายจากการเพาะเลี้ยงเซลล์ ตามคำแนะนำของผลิตภัณฑ์ในปัจจุบัน

ผลิตภัณฑ์นี้มีความเกี่ยวข้องกับการวิจัยเกี่ยวกับการอักเสบ การศึกษาที่เกี่ยวข้องกับ Th17 การกระตุ้นเซลล์ภูมิคุ้มกัน กลไกของโรคภูมิต้านตนเอง การติดเชื้อ และภูมิคุ้มกันต่อเนื้องอก

ชุดตรวจ ELISA สำหรับ IL-23 ในมนุษย์ SEKH-0034 ควรใช้กับตัวอย่างที่ผ่านการตรวจสอบความถูกต้องตามคำแนะนำการใช้งานผลิตภัณฑ์ในปัจจุบัน ก่อนทำการทดสอบ ควรพิจารณาความเข้มข้นที่คาดหวังด้วย เพื่อให้ตัวอย่างอยู่ในช่วงที่สามารถรายงานผลได้ของการทดสอบ หรือสามารถปรับให้เข้าสู่ช่วงดังกล่าวได้โดยใช้ขั้นตอนการเจือจางที่ผ่านการตรวจสอบความถูกต้องแล้ว

ชุด IL-23 สำหรับสัตว์ชนิดอื่นๆ

SEKM-0024 เมาส์ IL-23 ELISA Kit มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้เป็นตัวอย่างสำหรับหนู ชุดตรวจ ELISA สำหรับ IL-23 ในหนู SEKR-0072 ใช้สำหรับตัวอย่างหนู และ ชุดตรวจ ELISA สำหรับ IL-23 ในไก่ SEKCN-0130 สามารถนำไปใช้ในการวิจัยเกี่ยวกับไก่ได้

ชุดทดสอบที่ผลิตขึ้นสำหรับสัตว์ชนิดหนึ่งไม่ควรนำไปใช้กับสัตว์อีกชนิดหนึ่ง เว้นแต่จะมีการทดสอบและยืนยันการเกิดปฏิกิริยาข้ามสายพันธุ์แล้ว ชื่อโปรตีนที่คล้ายคลึงกันไม่ได้หมายความว่าแอนติบอดีที่ใช้ในการทดสอบจะจดจำเป้าหมายในลักษณะเดียวกัน

ควรเลือกใช้ชุดตรวจ ELISA สำหรับ IL-23 ในหนู และชุดตรวจเฉพาะสายพันธุ์อื่นๆ ตามแบบจำลองสัตว์ที่ใช้ในการศึกษา

บริษัท ปักกิ่ง โซลาร์ไบโอ ไซเอนซ์ แอนด์ เทคโนโลยี จำกัด ก่อตั้งขึ้นในปี 2547 และพัฒนาผลิตภัณฑ์สำหรับด้านภูมิคุ้มกันวิทยา ชีววิทยาของเซลล์ ชีววิทยาระดับโมเลกุล และชีวเคมี สามารถดูข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับผลิตภัณฑ์และระบบคุณภาพได้ที่ [เว็บไซต์บริษัท] หน้าเว็บบริษัท Solarbio.

ควรตรวจสอบอะไรบ้างก่อนอ่านผลลัพธ์สุดท้าย?

เริ่มต้นด้วยเส้นโค้งมาตรฐาน

เส้นกราฟการสอบเทียบควรเป็นไปตามเกณฑ์การยอมรับที่ระบุไว้ในชุดทดสอบ และใช้วิธีการปรับเส้นกราฟที่แนะนำ หลุมทดสอบที่ทำซ้ำควรมีความสอดคล้องกันภายในขีดจำกัดความแม่นยำที่ระบุไว้ในการทดสอบ

ค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างควบคุมควรอยู่ในระดับต่ำ ค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างควบคุมที่สูงอาจบ่งชี้ถึงการล้างไม่สมบูรณ์ การปนเปื้อน การจัดการสารเคมีไม่ถูกต้อง หรือการบ่มนานเกินไป

ตัวอย่างที่มีสัญญาณสูงกว่าขีดจำกัดสูงสุดที่สามารถรายงานได้ของการทดสอบ ควรเจือจางและทดสอบซ้ำหากระเบียบวิธีอนุญาต ผลลัพธ์ที่ต่ำกว่าขีดจำกัดต่ำสุดของการวัดปริมาณไม่ควรรายงานเป็นความเข้มข้นที่แน่นอน และผลลัพธ์ที่ต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับควรรายงานตามนั้น

ย้อนกลับไปดูขั้นตอนการเตรียมตัวอย่าง

ค่า IL-23 ที่ผิดปกติมักทำให้ผู้ตรวจสอบตั้งข้อสงสัยเกี่ยวกับชุดตรวจก่อน แต่สาเหตุของความคลาดเคลื่อนอาจเกิดขึ้นในขั้นตอนก่อนหน้านั้นก็ได้

ความหนาแน่นของเซลล์อาจแตกต่างกันระหว่างกลุ่ม สารกระตุ้นอาจถูกเตรียมอย่างไม่ถูกต้อง หรือสารละลายส่วนบนอาจมีเศษเซลล์ปนอยู่ นอกจากนี้ ตัวอย่างซีรั่มหรือพลาสมาอาจผ่านกระบวนการแช่แข็งและละลายซ้ำหลายครั้ง

การใช้ปิเปต การล้าง เวลาและอุณหภูมิในการบ่ม และการตั้งค่าเครื่องอ่านไมโครเพลท จำเป็นต้องมีความสม่ำเสมอ ELISA มีความไวต่อความแตกต่างในการจัดการ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อความเข้มข้นของไซโตไคน์ต่ำ

ข้อสรุป

การวัดระดับ IL-23 ในมนุษย์สามารถให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์ในการศึกษาเกี่ยวกับการอักเสบและการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน แต่ความเข้มข้นที่วัดได้จะต้องได้รับการตีความในบริบทของการออกแบบการทดลองโดยรวม

สำหรับการศึกษาการหลั่ง IL-23 ที่เกิดจากการกระตุ้นด้วย LPS นั้น เซลล์เม็ดเลือดขาวชนิดโมโนไซต์จากเลือดส่วนปลาย (PBMCs) เซลล์โมโนไซต์หรือเซลล์เดนดริติกจากผู้ป่วย และแบบจำลองเซลล์ไมอีลอยด์ที่มีลักษณะเฉพาะที่เหมาะสม จะมีความเหมาะสมทางชีววิทยามากกว่าเซลล์ลิมโฟไซต์ที่บริสุทธิ์ เซลล์ THP-1 สามารถประเมินผลด้วย LPS ได้ภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงที่ได้รับการตรวจสอบแล้ว เซลล์ Jurkat อาจมีประโยชน์สำหรับการศึกษาการส่งสัญญาณของเซลล์ T ที่กระตุ้นด้วย PMA แต่ไม่ควรนำเสนอเป็นแบบจำลองการหลั่ง IL-23 มาตรฐานโดยปราศจากการตรวจสอบความถูกต้องที่สนับสนุน

ในซีรั่มและพลาสมาปกติ ระดับ IL-23 อาจต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจวัดได้ ซึ่งอาจถือเป็นผลลัพธ์ที่ถูกต้องหากตัวควบคุมการทดสอบและกราฟมาตรฐานทำงานได้ตามปกติ

การจับคู่สายพันธุ์ การจัดการตัวอย่าง ความสม่ำเสมอของวัฒนธรรม และการดำเนินการทดสอบ ล้วนส่งผลต่อข้อมูลสุดท้าย สำหรับคำถามเกี่ยวกับการเลือกชุดทดสอบหรือเงื่อนไขการทดสอบ นักวิจัยสามารถติดต่อ Solarbio ก่อนเริ่มการทดสอบได้

คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: Human IL-23 คืออะไร?

A1: IL-23 ของมนุษย์เป็นไซโตไคน์แบบเฮเทอโรไดเมอร์ที่ก่อให้เกิดการอักเสบในกลุ่ม IL-12 ประกอบด้วยซับยูนิต p19 ที่เข้ารหัสโดย IL-23A และซับยูนิต p40 ที่เข้ารหัสโดย IL-12B

คำถามที่ 2: เหตุใด IL-23 จึงมีความเกี่ยวข้องกับเซลล์ Th17?

A2: IL-23 ส่งสัญญาณผ่านคอมเพล็กซ์ตัวรับที่ประกอบด้วย IL-23R และ IL-12Rβ1 ซึ่งจะกระตุ้นการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับ JAK2/TYK2 โดยมี STAT3 เป็น STAT ปลายทางหลักในปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับ Th17

คำถามที่ 3: สามารถตรวจพบ IL-23 ของมนุษย์ในสารละลายที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเซลล์ได้หรือไม่?

A3: ใช่ค่ะ สามารถทดสอบสารละลายส่วนบนของเซลล์เพาะเลี้ยงได้ เมื่อเซลล์ต้นแบบสามารถผลิต IL-23 ได้ และชนิดของตัวอย่างได้รับการตรวจสอบความถูกต้องสำหรับชุดตรวจ ELISA แล้ว โดยทั่วไปแล้ว PBMCs ที่มีโมโนไซต์ โมโนไซต์/มาโครฟาจ/เซลล์เดนดริติกปฐมภูมิ และเซลล์ไมอีลอยด์ต้นแบบที่มีลักษณะเฉพาะที่เหมาะสม จะเหมาะสมกว่าสำหรับการศึกษาการหลั่ง IL-23 มากกว่าลิมโฟไซต์บริสุทธิ์หรือเซลล์ Jurkat ค่ะ

คำถามที่ 4: สามารถใช้ LPS ในการทดลองเกี่ยวกับ IL-23 ได้หรือไม่?

A4: ใช่ LPS สามารถกระตุ้นการผลิต IL-23 ในเซลล์ภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดที่ตอบสนองได้ รวมถึงโมโนไซต์ แมโครฟาจ เซลล์เดนดริติก เซลล์เม็ดเลือดขาวส่วนปลายที่มีโมโนไซต์ และแบบจำลองเซลล์ไมอีลอยด์บางชนิด ไม่ควรสรุปว่ามันจะกระตุ้นการหลั่ง IL-23 จากลิมโฟไซต์ที่บริสุทธิ์

Q5: สามารถใช้ PMA กับเซลล์ Jurkat ได้หรือไม่?

A5: PMA สามารถกระตุ้นเซลล์ Jurkat และมีประโยชน์ในการศึกษาการส่งสัญญาณของเซลล์ T แต่เซลล์ Jurkat ไม่ใช่แบบจำลองมาตรฐานสำหรับการผลิต IL-23 ที่หลั่งออกมา ไม่ควรนำเสนอสารละลายส่วนบนของเซลล์ Jurkat ที่ได้รับการบำบัดด้วย PMA เป็นตัวควบคุมเชิงบวกของ IL-23 ที่ได้รับการตรวจสอบแล้วโดยปราศจากข้อมูลสนับสนุน

Q6: เหตุใดบางครั้งจึงตรวจไม่พบ IL-23 ในซีรั่มหรือพลาสมาปกติ?

A6: IL-23 อาจมีอยู่ในความเข้มข้นต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจวัดของวิธีวิเคราะห์ ซึ่งเป็นเรื่องปกติสำหรับไซโตไคน์ที่มีปริมาณน้อยในตัวอย่างปกติ

Q7: ชุดตรวจ ELISA สำหรับ IL-23 ในหนู สามารถใช้ทดสอบกับตัวอย่างจากมนุษย์ได้หรือไม่?

A7: ไม่ ควรทดสอบตัวอย่างจากมนุษย์ด้วยชุดตรวจ Human IL-23 ELISA Kit เว้นแต่ผู้ผลิตจะตรวจสอบยืนยันการเกิดปฏิกิริยาข้ามสายพันธุ์ไว้โดยเฉพาะแล้ว

Q8: เมื่อพบว่าบ่อที่ซ้ำกันไม่ตรงกัน ควรตรวจสอบอะไรบ้าง?

A8: ควรทบทวนความแม่นยำในการปิเปต การผสมตัวอย่าง การล้าง ระยะเวลาการบ่ม ตำแหน่งของเพลท ฟองอากาศ และการเตรียมสารเคมีทั้งหมด